| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 西他列汀 | 第11-18页 |
| 1.1.1 西他列汀的作用机理 | 第11-12页 |
| 1.1.2 西他列汀的合成 | 第12-18页 |
| 1.2 ω-转氨酶制备手性胺 | 第18-23页 |
| 1.2.1 转氨酶的分类 | 第18-19页 |
| 1.2.2 转氨酶的催化机理 | 第19-20页 |
| 1.2.3 ω-转氨酶制备手性胺 | 第20-23页 |
| 1.3 ω-转氨酶的改造和高通量筛选 | 第23-24页 |
| 1.4 本课题的研究思路和主要内容 | 第24-27页 |
| 第2章 ω-转氨酶高通量筛选方法的建立 | 第27-41页 |
| 2.1 引言 | 第27-29页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.2 主要实验材料和试剂 | 第30页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.4 分析方法 | 第35-37页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第37-39页 |
| 2.3.1 重组ATA-117蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2.3.2 液体体系显色转氨反应 | 第38页 |
| 2.3.3 平板体系显色转氨反应 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第3章 ATA-117的位点饱和突变改造 | 第41-53页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.2 主要实验材料及试剂 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-48页 |
| 3.3.1 四位点饱和突变引物的设计 | 第43页 |
| 3.3.2 模板质粒的提取 | 第43-44页 |
| 3.3.3 BL21及DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| 3.3.4 突变文库的构建 | 第44-46页 |
| 3.3.5 突变文库的筛选 | 第46-47页 |
| 3.3.6 有效突变的叠加 | 第47-48页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第48-51页 |
| 3.4.1 定点饱和突变的PCR结果 | 第48页 |
| 3.4.2 突变库平板筛选结果 | 第48-50页 |
| 3.4.3 突变体基因测序分析 | 第50-51页 |
| 3.4.4 叠加突变结果分析 | 第51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 第4章 突变株T126L的高密度发酵 | 第53-61页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第53-56页 |
| 4.2.1 主要实验仪器 | 第53页 |
| 4.2.2 主要实验材料和试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第56-60页 |
| 4.3.1 诱导剂浓度对突变株T126L蛋白表达的影响 | 第56页 |
| 4.3.2 诱导温度对突变株T126L蛋白表达的影响 | 第56-57页 |
| 4.3.3 诱导时机对突变株T126L蛋白表达的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.4 诱导时长对突变株T126L蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.5 突变株T126L高密度发酵结果分析 | 第59-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第5章 突变株T126L酶催化制备西他列汀的工艺优化 | 第61-69页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料和方法 | 第61-62页 |
| 5.2.1 主要实验仪器 | 第61-62页 |
| 5.2.2 实验材料 | 第62页 |
| 5.2.3 分析方法 | 第62页 |
| 5.3 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.3.1 最佳助溶剂DMSO浓度的比较 | 第62页 |
| 5.3.2 最佳反应温度的比较 | 第62-63页 |
| 5.3.3 最适pH的比较 | 第63页 |
| 5.3.4 突变株T126L酶催化制备西他列汀的小试反应 | 第63页 |
| 5.3.5 产物的分离纯化和鉴定 | 第63-64页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第64-67页 |
| 5.4.1 最适助溶剂浓度的对比结果 | 第64-65页 |
| 5.4.2 最适反应温度的对比结果 | 第65页 |
| 5.4.3 最适反应pH的对比结果 | 第65-66页 |
| 5.4.4 产物的分离纯化和鉴定 | 第66-67页 |
| 5.5 本章小结 | 第67-69页 |
| 第6章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 6.1 结论 | 第69-70页 |
| 6.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
