| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| PARTⅠ 卵母细胞GVBD抑制对减数分裂进程后作用 | 第13-39页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 减数分裂恢复调控 | 第13-17页 |
| 1.1.1 MPF与减数分裂 | 第13-15页 |
| 1.1.2 MAPK与减数分裂 | 第15-17页 |
| 1.2 不同抑制剂抑制减数分裂恢复 | 第17-20页 |
| 1.2.1 蛋白磷酸化抑制剂 | 第17-18页 |
| 1.2.2 蛋白质合成抑制剂CHX | 第18-19页 |
| 1.2.3 提高卵母细胞内cAMP水平 | 第19-20页 |
| 1.3 抑制减数分裂恢复对卵母细胞影响 | 第20-23页 |
| 1.3.1 核进程变化 | 第20-21页 |
| 1.3.2 蛋白和mRNA变化 | 第21-23页 |
| 1.4 EGF对减数分裂作用 | 第23页 |
| 1.5 本文主要研究内容 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-28页 |
| 2.1 主要试剂及配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验动物饲养及处理 | 第26页 |
| 2.3 小鼠和猪卵母细胞收集 | 第26页 |
| 2.4 卵母细胞体外培养 | 第26页 |
| 2.5 减数分裂进程观察 | 第26-27页 |
| 2.6 Western杂交 | 第27页 |
| 2.7 抗体选择 | 第27页 |
| 2.8 数据分析 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-35页 |
| 3.1 ROS抑制后,加速猪卵母细胞减数分裂进程,减缓小鼠卵母细胞减数分裂进程 | 第28-29页 |
| 3.2 Western blot分析小鼠和猪卵母细胞抑制后cyclin B,总CDC2A,无活性和有活性P-CDC2A变化】 | 第29-30页 |
| 3.3 抑制期间MPF组分变化与减数分裂进程的关系 | 第30-31页 |
| 3.4 抑制过程中添加钒酸钠减慢小鼠和猪卵母细胞减数分裂进程 | 第31-33页 |
| 3.5 抑制期间通过添加EGF促进前MPF向MPF转化加速小鼠和猪卵母细胞减数分裂进程 | 第33页 |
| 3.6 抑制期间EGF对小鼠和猪卵母细胞cyclin B,无活性和有活性P-CDC2A影响 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 4.1 抑制过程中cyclin B蛋白变化 | 第35页 |
| 4.2 抑制过程中前MPF向MPF转化 | 第35-36页 |
| 4.3 抑制过程中添加EGF作用 | 第36-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| PARTⅡ大鼠卵母细胞体外成熟系统优化 | 第39-71页 |
| 1 前言 | 第39-54页 |
| 1.1 大鼠卵母细胞自发激活 | 第39-41页 |
| 1.1.1 自发激活的影响因素 | 第40页 |
| 1.1.2 自发激活的判定标准 | 第40-41页 |
| 1.1.3 抑制大鼠卵母细胞自发激活的方法 | 第41页 |
| 1.1.4 自发激活对胚胎发育及核移植克隆的影响 | 第41页 |
| 1.2 卵母细胞体外成熟 | 第41-43页 |
| 1.2.1 细胞质成熟和核成熟 | 第42页 |
| 1.2.2 卵母细胞体外成熟 | 第42-43页 |
| 1.3 影响体外培养成熟的因素 | 第43-46页 |
| 1.3.1 体外成熟的培养液 | 第43页 |
| 1.3.2 卵丘细胞的影响 | 第43-44页 |
| 1.3.3 氧化应激对卵母细胞体外成熟的影响 | 第44页 |
| 1.3.4 卵泡直径与卵母细胞直径对卵母细胞体外成熟的影响 | 第44-45页 |
| 1.3.5 动物年龄的影响 | 第45-46页 |
| 1.4 提高体外成熟的卵母细胞的质量方法 | 第46-49页 |
| 1.4.1 抑制体外自发成熟 | 第46-47页 |
| 1.4.2 卵丘共培养 | 第47-48页 |
| 1.4.3 添加胱氨酸/半胱胺 | 第48-49页 |
| 1.4.4 添加外源性卵分泌生长因子 | 第49页 |
| 1.5 卵母细胞体外成熟质量的检测指标 | 第49-53页 |
| 1.5.1 卵母细胞的形态学检测 | 第49-50页 |
| 1.5.2 减数分裂进程与卵母细胞体外成熟 | 第50页 |
| 1.5.3 卵母细胞内细胞器检测 | 第50-51页 |
| 1.5.4 体外胚胎发育 | 第51-52页 |
| 1.5.5 卵母细胞胞质中谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平 | 第52页 |
| 1.5.6 发育相关基因检测 | 第52-53页 |
| 1.6 本文主要研究内容 | 第53-54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-59页 |
| 2.1 主要试剂及配制 | 第54页 |
| 2.2 实验动物及卵母细胞获取 | 第54-55页 |
| 2.3 卵母细胞体外成熟培养 | 第55页 |
| 2.4 卵母细胞孤雌激活及胚胎培养 | 第55页 |
| 2.5 卵母细胞体外受精 | 第55-56页 |
| 2.6 卵母细胞自发激活判定 | 第56页 |
| 2.7 胚胎移植 | 第56页 |
| 2.7.1 制作不育雄鼠的输精管切除术 | 第56页 |
| 2.7.2 受体母鼠准备及胚胎移植 | 第56页 |
| 2.8 核进程观察 | 第56-57页 |
| 2.9 皮质颗粒染色 | 第57页 |
| 2.10 卵母细胞内ROS水平的检测 | 第57页 |
| 2.11 GSH水平检测 | 第57-58页 |
| 2.12 发育相关基因检测 | 第58页 |
| 2.13 数据分析 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-67页 |
| 3.1 不同成熟条件对卵母细胞核进程影响 | 第59页 |
| 3.2 不同成熟条件对卵母细胞自发激活影响 | 第59-60页 |
| 3.3 不同成熟条件对卵母细胞孤雌激活后胚胎发育影响 | 第60-61页 |
| 3.4 不同成熟条件对卵母细胞体外受精后胚胎发育影响 | 第61-62页 |
| 3.4.1 体外受精时获能液摸索 | 第61页 |
| 3.4.2 体外受精时获能时间确定 | 第61-62页 |
| 3.4.3 不同成熟条件对大鼠体外受精后胚胎发育能力影响 | 第62页 |
| 3.5 不同成熟条件对胚胎着床后发育影响 | 第62-63页 |
| 3.6 不同成熟条件对卵母细胞ROS水平影响 | 第63页 |
| 3.7 不同成熟条件对卵母细胞谷胱甘肽水平影响 | 第63-64页 |
| 3.8 不同成熟条件对卵母细胞成熟过程中皮质颗粒分布影响 | 第64-65页 |
| 3.9 不同成熟条件对发育相关基因表达的影响 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 4.1 添加胱氨酸、半胱胺及卵丘共培养对胞质成熟影响 | 第67页 |
| 4.2 大鼠卵母细胞体外成熟后胚胎移植 | 第67-68页 |
| 4.3 胞质成熟相关指标 | 第68-69页 |
| 4.4 大鼠体外受精条件优化 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| References of part Ⅰ | 第71-82页 |
| References of part Ⅱ | 第82-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| Publication List | 第97页 |
