| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 暗黑鳃金龟的研究概况 | 第13-16页 |
| 1.1.1 暗黑鳃金龟的发生规律 | 第13-14页 |
| 1.1.2 暗黑鳃金龟成虫的生态习性 | 第14页 |
| 1.1.3 暗黑鳃金龟的防治 | 第14-16页 |
| 1.2 昆虫感知的信息化合物 | 第16-18页 |
| 1.2.1 植物挥发物 | 第16-17页 |
| 1.2.2 昆虫信息素 | 第17页 |
| 1.2.3 暗黑鳃金龟性信息素的应用研究 | 第17-18页 |
| 1.3 昆虫嗅觉的化学感受机理研究 | 第18-24页 |
| 1.3.1 昆虫嗅觉识别的一般过程 | 第18-19页 |
| 1.3.2 气味结合蛋白的发现 | 第19页 |
| 1.3.3 气味结合蛋白的一般特征及分类 | 第19-20页 |
| 1.3.4 气味结合蛋白的最新结构研究 | 第20-21页 |
| 1.3.5 气味结合蛋白的研究方法 | 第21页 |
| 1.3.6 气味结合蛋白的生理功能及新发现 | 第21-22页 |
| 1.3.7 昆虫嗅觉编码涉及的其他重要蛋白 | 第22-24页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.1 虫源及饲养方法 | 第26页 |
| 2.2 主要的试剂及仪器 | 第26-29页 |
| 2.3 暗黑鳃金龟雌虫触角和足转录组 | 第29-33页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.3.2 转录组测序流程及构建c DNA文库 | 第30页 |
| 2.3.3 序列组装 | 第30-31页 |
| 2.3.4 转录组信息的分析 | 第31-32页 |
| 2.3.5 嗅觉基因的识别与分析 | 第32-33页 |
| 2.4 暗黑鳃金龟Hpar OBP15a基因全长的克隆 | 第33-36页 |
| 2.4.1 总RNA的提取和c DNA合成 | 第33页 |
| 2.4.2 基因扩增 | 第33-34页 |
| 2.4.3 序列分析 | 第34页 |
| 2.4.4 Hpar OBP15a表达谱 | 第34-35页 |
| 2.4.5 PCR产物的回收与纯化 | 第35页 |
| 2.4.6 基因片段的连接 | 第35页 |
| 2.4.7 重组质粒转化感受态细胞及阳性克隆验证 | 第35-36页 |
| 2.5 Hpar OBP15a基因的原核表达及蛋白纯化 | 第36-40页 |
| 2.5.1 质粒提取 | 第36-37页 |
| 2.5.2 原核表达载体的构建 | 第37页 |
| 2.5.3 Hpar OBP15a蛋白的诱导条件摸索 | 第37-38页 |
| 2.5.4 SDS-PAGE电泳检测 | 第38-39页 |
| 2.5.5 蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 2.6 荧光竞争结合试验 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-79页 |
| 3.1 暗黑鳃金龟雌虫触角和足转录组数据分析 | 第42-46页 |
| 3.1.1 暗黑鳃金龟雌虫触角和足转录组数据概况 | 第42-43页 |
| 3.1.2 暗黑鳃金龟雌虫触角和足转录组Unigene的KOG分析 | 第43页 |
| 3.1.3 暗黑鳃金龟雌虫触角和足转录组Unigene的GO分类 | 第43-46页 |
| 3.2 嗅觉相关基因注释与分析 | 第46-61页 |
| 3.2.1 暗黑鳃金龟气味结合蛋白Hpar OBP的识别 | 第46-53页 |
| 3.2.2 暗黑鳃金龟化学感受蛋白Hpar CSP的识别 | 第53页 |
| 3.2.3 暗黑鳃金龟感觉神经元膜蛋白Hpar SNMP的识别 | 第53-55页 |
| 3.2.4 暗黑鳃金龟气味受体Hpar OR的识别 | 第55-58页 |
| 3.2.5 暗黑鳃金龟离子型受体Hpar IR的识别 | 第58-61页 |
| 3.3 Hpar OBP15a基因全长的克隆 | 第61-64页 |
| 3.3.1 暗黑鳃金龟触角、足总RNA检测 | 第61-62页 |
| 3.3.2 Hpar OBP15a序列扩增 | 第62页 |
| 3.3.3 Hpar OBP15a和p GEM-T4重组质粒PCR检测 | 第62-63页 |
| 3.3.4 原核表达载体构建 | 第63-64页 |
| 3.4 Hpar OBP15a基因序列分析 | 第64-69页 |
| 3.4.1 Hpar OBP15a基因序列分析 | 第64-65页 |
| 3.4.2 Hpar OBP15a预测蛋白理化性质分析 | 第65页 |
| 3.4.3 Hpar OBP15a预测蛋白的疏水性分析 | 第65-66页 |
| 3.4.4 Hpar OBP15a蛋白氨基酸序列及系统发育分析 | 第66-68页 |
| 3.4.5 Hpar OBP15a基因的组织分布及相对表达量 | 第68-69页 |
| 3.5 Hpar OBP15a基因原核表达及蛋白纯化 | 第69-74页 |
| 3.5.1 Hpar OBP15a重组质粒的构建 | 第69-70页 |
| 3.5.2 重组质粒p ET30-Hpar OBP15a的诱导表达 | 第70-74页 |
| 3.6 Hpar OBP15a蛋白的荧光测定和配体结合试验 | 第74-79页 |
| 4 讨论 | 第79-82页 |
| 4.1 暗黑鳃金龟转录组分析 | 第79-80页 |
| 4.2 Hpar OBP15a基因的克隆及分析 | 第80页 |
| 4.3 Hpar OBP15a蛋白的荧光测定和配体结合试验 | 第80-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第94页 |
