| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1. 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 Rheb简介 | 第11-12页 |
| 1.2 Rheb突变的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 mTOR信号通路研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 PI3K/AKT/mTOR信号通路 | 第13-14页 |
| 1.3.2 AMPK信号通路 | 第14页 |
| 1.3.3 MAPK（ERK1/2）信号通路 | 第14-15页 |
| 1.4 mTOR信号通路与肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.4.1 mTOR信号通路与肿瘤发生发展 | 第15-16页 |
| 1.4.2 mTOR信号通路与肿瘤治疗 | 第16页 |
| 1.5 基因测序与肿瘤研究 | 第16-19页 |
| 1.5.1 基因测序简介 | 第16-17页 |
| 1.5.2 基因测序的检测方法 | 第17-19页 |
| 1.5.3 基因测序在肿瘤研究中的应用 | 第19页 |
| 1.6 本论文的研究思路 | 第19-21页 |
| 2.构建RhebY35N过表达细胞系及鉴定 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 重组质粒的扩增及提取 | 第22-24页 |
| 2.2.2 慢病毒侵染法构建Rheb的过表达细胞系 | 第24-25页 |
| 2.2.3 Western Blot | 第25-26页 |
| 2.3 Rheb-Y35N过表达细胞系的验证 | 第26-29页 |
| 2.3.1 基因测序检测RhebWY/Y35N质粒的准确性 | 第26页 |
| 2.3.2 绿色荧光蛋白（GFP）表达的检测 | 第26-28页 |
| 2.3.3 Western Blot验证RhebY35N的蛋白表达水平 | 第28-29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-30页 |
| 3. RhebY35N对MAPK和AMPK通路的调节 | 第30-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 细胞生长曲线的测定 | 第30-31页 |
| 3.2.2 软琼脂克隆实验 | 第31页 |
| 3.3 RhebY35N对MAPK通路的影响 | 第31-34页 |
| 3.3.1 RhebY35N突变促进肿瘤发生发展 | 第31-33页 |
| 3.3.2 RhebY35N突变持续激活MAPK通路 | 第33-34页 |
| 3.4 RhebY35N对AMPK通路的影响 | 第34-35页 |
| 3.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 4. RhebY35N对MAPK和AMPK通路的调节机制 | 第36-41页 |
| 4.1 实验材料 | 第36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 4.2.1 瞬时转染 | 第36页 |
| 4.2.2 瞬时共转染（结果 4.3.2） | 第36-37页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，CO-IP) | 第37-38页 |
| 4.3 RhebY35N对MAPK和AMPK通路调节机制 | 第38-40页 |
| 4.3.1 Rheb与AMPK相互作用 | 第38-39页 |
| 4.3.2 RhebWT与RhebY35N竞争性结合AMPK | 第39-40页 |
| 4.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 5. 活体研究RhebY35N对肿瘤的影响及药物对肿瘤作用 | 第41-46页 |
| 5.1 实验材料 | 第41页 |
| 5.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 5.2.1 皮下种瘤方法 | 第41页 |
| 5.2.2 测量及给药方式 | 第41页 |
| 5.2.3 免疫组化 | 第41-42页 |
| 5.3 RhebY35N对肿瘤的影响 | 第42-43页 |
| 5.4 药物对RhebY35N肿瘤的作用效果 | 第43-45页 |
| 5.4.1 验证药物对瘤体的作用 | 第43-44页 |
| 5.4.2 验证药物作用后瘤体内蛋白的变化 | 第44-45页 |
| 5.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 6. 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录 英文缩写一览表 | 第53-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
