| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-23页 |
| 1 引言 | 第14-20页 |
| 1.1 诱导性多能干细胞概述 | 第14-15页 |
| 1.2 iPS诱导分化为巨噬细胞的方法体系 | 第15-19页 |
| 1.2.1 基于体细胞共培养诱导iPS分化为巨噬细胞的方法 | 第15-17页 |
| 1.2.2 基于EB形成诱导iPS分化为巨噬细胞的方法 | 第17页 |
| 1.2.3 iPS诱导分化为巨噬细胞的其他方法 | 第17-19页 |
| 1.3 体外诱导iPS分化为巨噬细胞的常用诱导物 | 第19-20页 |
| 1.3.1 集落刺激因子 | 第19页 |
| 1.3.2 白细胞介素-3 | 第19-20页 |
| 2 实验目的与意义 | 第20-21页 |
| 3 实验内容及设计方案 | 第21-23页 |
| 3.1 本课题研究内容 | 第21-22页 |
| 3.2 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 人iPS体外培养与特性鉴定 | 第23-35页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第23-25页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第23页 |
| 1.2 主要溶液的配置 | 第23-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.1 hiPS培养 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第25页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第25页 |
| 2.1.3 细胞冻存 | 第25-26页 |
| 2.1.4 EB的培养 | 第26页 |
| 2.2 碱性磷酸酶（AKP）染色 | 第26页 |
| 2.3 免疫荧光 | 第26页 |
| 2.4 RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.5 RT-PCR | 第27-28页 |
| 2.6 qRT-PCR | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-33页 |
| 3.1 hiPS的培养及形态学观察 | 第29-30页 |
| 3.2 AKP染色 | 第30-31页 |
| 3.3 RT-PCR检测hiPS多能性基因的表达 | 第31页 |
| 3.4 免疫细胞化学检测hiPS多能性基因的表达 | 第31-32页 |
| 3.5 hiPS的分化能力检测 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 人iPS来源巨噬细胞诱导分化体系的建立 | 第35-47页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第35-36页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第35页 |
| 1.2 主要溶液的配置 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-39页 |
| 2.1 小鼠骨髓基质细胞OP9细胞培养 | 第36页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第36页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第36页 |
| 2.2 人外周血来源单核细胞系THP-1 细胞培养 | 第36页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第36页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第36页 |
| 2.3 THP-1 细胞诱导成为巨噬细胞 | 第36-37页 |
| 2.4 OP9细胞饲养层的处理 | 第37页 |
| 2.5 hiPS与OP9饲养层细胞共培养的诱导分化途径 | 第37页 |
| 2.6 hiPS形成EB的诱导分化途径 | 第37-38页 |
| 2.7 hiPS来源巨噬细胞的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.7.1 形态学观察 | 第38页 |
| 2.7.2 吉姆萨染色 | 第38页 |
| 2.7.3 吞噬功能检测 | 第38页 |
| 2.7.4 非特异性酯酶染色（α-NAE法） | 第38页 |
| 2.7.5 流式细胞仪检测细胞表面抗原表达 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-45页 |
| 3.1 共培养诱导分化的途径 | 第39-41页 |
| 3.2 EB诱导分化的途径 | 第41-43页 |
| 3.3 hiPS来源的巨噬细胞的鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3.1 吉姆萨染色 | 第43页 |
| 3.3.2 非特异性酯酶染色（α-NAE法） | 第43-44页 |
| 3.3.3 吞噬实验 | 第44页 |
| 3.3.4 表面特异性抗原检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 人iPS来源巨噬细胞抗结核免疫功能检测 | 第47-59页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第47-49页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第47页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第47-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-52页 |
| 2.1 BCG感染 | 第49页 |
| 2.2 细胞凋亡检测 | 第49-50页 |
| 2.3 细胞裂解液的制备 | 第50页 |
| 2.4 蛋白浓度测定 | 第50-51页 |
| 2.4.1 标准曲线制作 | 第50页 |
| 2.4.2 样品蛋白浓度测定 | 第50-51页 |
| 2.5 蛋白质印迹法检测蛋白表达与激活 | 第51页 |
| 2.6 上清中NO的检测 | 第51页 |
| 2.7 上清中TNF-α 的检测 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 3.1 流式细胞仪检测BCG刺激后的细胞凋亡 | 第52-54页 |
| 3.2 BCG刺激后上清中NO的表达检测 | 第54-55页 |
| 3.3 BCG刺激后上清中TNF-α 的表达检测 | 第55-57页 |
| 3.4 BCG刺激后检测凋亡相关蛋白的表达变化 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
