| 摘要 | 第3-10页 |
| ABSTRACT | 第10-18页 |
| 第1章 引言 | 第22-30页 |
| 1.1 牙本质发育异常的分类及DD-Ⅰ主要特征 | 第22-23页 |
| 1.2 DD-Ⅰ型疾病的致病基因 | 第23页 |
| 1.3 牙齿的发育过程与机制 | 第23-25页 |
| 1.4 VPS4B与牙齿发育关键信号调节通路—WNT经典通路之间的关系 | 第25页 |
| 1.5 牙齿发育研究模式生物—斑马鱼 | 第25-30页 |
| 第2章 实验材料 | 第30-37页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 分析软件和数据库 | 第31-32页 |
| 2.3 相关试剂 | 第32-34页 |
| 2.4 实验动物 | 第34-37页 |
| 第3章 实验方法 | 第37-59页 |
| 3.1 DD-Ⅰ家系(见图4-3) | 第37页 |
| 3.2 技术路线图 | 第37-38页 |
| 3.3 酚/氯仿法提取外周血基因组DNA | 第38-39页 |
| 3.4 确定突变位点 | 第39-40页 |
| 3.5 人群筛查 | 第40-41页 |
| 3.6 RNA提取 | 第41-42页 |
| 3.7 RNA反转录 | 第42-43页 |
| 3.8 基因转录本分析 | 第43页 |
| 3.9 构建VPS4B表达载体 | 第43-45页 |
| 3.10 RT-PCR检测VPS4B基因时空表达 | 第45-46页 |
| 3.11 细胞培养和VPS4B突变体功能分析 | 第46-52页 |
| 3.12 观察斑马鱼牙齿的发育-茜素红染色 | 第52-53页 |
| 3.13 RT-PCR检测同源基因在斑马鱼中的表达 | 第53页 |
| 3.14 显微注射 | 第53-54页 |
| 3.15 原位杂交 | 第54-57页 |
| 3.16 体外合成VPS4B基因mRNA | 第57-58页 |
| 3.17 MO合成 | 第58-59页 |
| 第4章 实验结果 | 第59-81页 |
| 4.1 DD-Ⅰ家系临床表型 | 第59-61页 |
| 4.2 连锁分析与突变位点确定 | 第61-63页 |
| 4.3 人群突变频率筛查 | 第63-64页 |
| 4.4 酶切鉴定分析 | 第64-65页 |
| 4.5 基因特异性转录本检测 | 第65-66页 |
| 4.6 VPS4B基因时空表达谱 | 第66-67页 |
| 4.7 VPS4B突变体生物信息预测 | 第67-68页 |
| 4.8 VPS4B牙龈组织细胞中转录水平检测 | 第68-69页 |
| 4.9 VPS4B细胞定位 | 第69-70页 |
| 4.10 VPS4B蛋白表达水平 | 第70-71页 |
| 4.11 VPS4B结合CHMP4B对WNT5A经典通路的影响 | 第71-73页 |
| 4.12 RT-PCR与整体原位杂交检测vps4b基因表达 | 第73-74页 |
| 4.13 vps4b敲低表达后对斑马鱼早期牙齿发育的影响 | 第74-76页 |
| 4.14 VPS4B拯救与过表达对斑马鱼早期牙齿发育的影响 | 第76-78页 |
| 4.15 vps4b敲低表达后对斑马鱼早期牙齿发育相关基因的影响 | 第78-81页 |
| 第5章 分析与讨论 | 第81-87页 |
| 5.1 VPS4B突变体的发现与验证 | 第81-82页 |
| 5.2 深度内含子区剪切突变验证 | 第82页 |
| 5.3 VPS4B对牙齿发育的影响 | 第82-84页 |
| 5.4 斑马鱼为模式生物来研究VPS4B基因 | 第84-86页 |
| 5.5 不足与展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 攻读硕士学位期间所发表论文 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 英文缩略词表 | 第94-96页 |
