| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1. AK基因的发现和命名 | 第12页 |
| 2. AK的细胞内定位 | 第12-13页 |
| 3. AK的作用机制 | 第13-14页 |
| 4. AK各亚型的研究进展 | 第14-16页 |
| 5. AMP信号通信系统 | 第16-20页 |
| 第二章 斑马鱼Ak生物信息学分析以及其在胚胎发育早期和成体各组织器官表达的定量分析 | 第20-50页 |
| 1. 前言 | 第20页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第20-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验动物及组织胚胎 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂耗材 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要实验溶液配制 | 第21页 |
| 2.1.4 主要实验仪器及设备 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 各AK氨基酸序列的获得 | 第21-22页 |
| 2.2.2 Ak序列比对与系统进化分析 | 第22页 |
| 2.2.3 cDNA模板制备 | 第22-24页 |
| 2.3.4 qPCR检测各ak在斑马鱼胚胎发育早期和成体各组织器官的表达 | 第24-26页 |
| 3. 结果与讨论 | 第26-50页 |
| 3.1 Ak序列比对和系统进化分析 | 第26-39页 |
| 3.1.1 Ak序列比对 | 第26-34页 |
| 3.1.2 AK系统进化树分析 | 第34-39页 |
| 3.2 各ak在斑马鱼胚胎发育早期和成体各组织器官的表达 | 第39-50页 |
| 3.2.1 ak在胚胎发育早期的表达 | 第40-45页 |
| 3.2.2 ak在成体各组织器官的表达 | 第45-50页 |
| 第三章 利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼ak4、ak6和ak7a基因 | 第50-69页 |
| 1. 前言 | 第50-51页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第51-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 2.1.1 实验动物和胚胎 | 第51页 |
| 2.1.2 主要载体、工具酶和试剂盒 | 第51页 |
| 2.1.3 主要实验溶液的配制 | 第51-52页 |
| 2.1.4 实验仪器及设备 | 第52页 |
| 2.2 实验方法 | 第52-58页 |
| 2.2.1 Cas9靶位选择与引物合成 | 第52页 |
| 2.2.2 gRNA合成 | 第52-55页 |
| 2.2.3 Cas9 mRNA合成 | 第55-56页 |
| 2.2.4 显微注射 | 第56页 |
| 2.2.5 靶位点有效性检测 | 第56-57页 |
| 2.2.6 F0代突变体的筛选 | 第57-58页 |
| 3. 结果与讨论 | 第58-69页 |
| 3.1 合成gRNA | 第58-63页 |
| 3.2 合成Cas9 mRNA | 第63-64页 |
| 3.3 制备F0突变体 | 第64-66页 |
| 3.4 纯合突变体后代的获得 | 第66-69页 |
| 第四章 腺苷酸激酶ak4敲除对雄性斑马鱼生殖细胞凋亡的影响 | 第69-82页 |
| 1. 前言 | 第69页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第69-73页 |
| 2.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第69页 |
| 2.1.2 实验试剂耗材 | 第69页 |
| 2.1.3 主要实验溶液的配置 | 第69-70页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第70页 |
| 2.2 实验方法 | 第70-73页 |
| 2.2.1 HPLC测定精巢中ATP、 ADP以及AMP的含量 | 第70-71页 |
| 2.2.2 TUNEL检测精巢细胞凋亡 | 第71-72页 |
| 2.2.3 FCM检测精巢细胞凋亡 | 第72页 |
| 2.2.4 雄性突变体生殖能力检查 | 第72-73页 |
| 2.2.5 突变体胚胎发育的观察 | 第73页 |
| 3. 结果与讨论 | 第73-82页 |
| 3.1 HPLC检测精巢中ATP、 ADP和AMP含量 | 第73-77页 |
| 3.1.1 标准曲线的制备 | 第73-75页 |
| 3.1.2 HPLC检测ATP、 ADP和AMP含量 | 第75-77页 |
| 3.2 TUNEL检测精巢细胞凋亡 | 第77-78页 |
| 3.3 FCM检测精巢细胞凋亡 | 第78页 |
| 3.4 ak4突变对雄性斑马鱼后代的影响 | 第78-80页 |
| 3.5 突变体早期胚胎发育情况 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 学术论文评阅及答辩情况表 | 第91页 |
