| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| 1.1 酶的固定化 | 第8-13页 |
| 1.1.1 酶的固定化方法 | 第9-11页 |
| 1.1.2 纤维素结合域固定化的研究 | 第11-13页 |
| 1.2 L-氨基酸氧化酶 | 第13-14页 |
| 1.3 L-谷氨酸氧化酶简介与应用 | 第14-18页 |
| 1.3.1 L-谷氨酸 | 第14-15页 |
| 1.3.2 L-谷氨酸氧化酶的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.3 L-谷氨酸氧化酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 本论文研究的内容及意义 | 第18-20页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第18页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第20-21页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.5 培养基、抗生素及常用缓冲液的配制 | 第21-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-37页 |
| 2.2.1 Gox重组质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.2 Gox-CBD原核表达载体的构建 | 第24-29页 |
| 2.2.3 Gox的表达与纯化 | 第29-32页 |
| 2.2.4 融合蛋白Gox-CBD的表达与纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.5 蛋白浓度及融合蛋白结合量测定 | 第33-34页 |
| 2.2.6 L-谷氨酸氧化酶的酶学测定方法 | 第34-35页 |
| 2.2.7 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的测定 | 第35页 |
| 2.2.8 谷氨酸氧化酶的酶活性质研究 | 第35页 |
| 2.2.9 结合蛋白相关性质的测定方法 | 第35-36页 |
| 2.2.10 酶常数的测定 | 第36页 |
| 2.2.11 一步纯化法纯化Gox-CBD | 第36-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-56页 |
| 3.1 Gox的重组蛋白的制备 | 第37-42页 |
| 3.1.1 pET-24a(+)-Gox重组质粒的构建 | 第37页 |
| 3.1.2 Gox重组蛋白的小量诱导表达 | 第37-40页 |
| 3.1.3 Gox重组蛋白的纯化 | 第40-42页 |
| 3.2 Gox-CBD重组蛋白的制备 | 第42-45页 |
| 3.2.1 Gox-CBD重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.2 Gox-CBD重组蛋白的诱导表达小试 | 第43-45页 |
| 3.2.3 Gox-CBD重组蛋白的获得 | 第45页 |
| 3.3 L-谷氨酸氧化酶的蛋白浓度及酶活测定 | 第45-47页 |
| 3.3.1 L-谷氨酸氧化酶的蛋白浓度测定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 L-谷氨酸氧化酶的酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.4 FAD对L-谷氨酸氧化酶酶活的影响 | 第47页 |
| 3.5 重组蛋白结合量的测定 | 第47-48页 |
| 3.6 Gox和Gox-CBD的酶活特性 | 第48-51页 |
| 3.6.1 pH对酶活性影响 | 第48页 |
| 3.6.2 最适反应温度和热稳定性 | 第48-49页 |
| 3.6.3 金属盐对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.6.4 酶的底物特异性 | 第50-51页 |
| 3.7 固定化酶结合稳定性及重复性操作的研究 | 第51-53页 |
| 3.8 K_m值的测定 | 第53-54页 |
| 3.9 一步纯化融合蛋白Gox-CBD | 第54-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 5 展望 | 第57-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-65页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66页 |