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L-谷氨酸氧化酶的制备及固定化研究

摘要第4-5页
ABSTRACT第5页
1 前言第8-20页
    1.1 酶的固定化第8-13页
        1.1.1 酶的固定化方法第9-11页
        1.1.2 纤维素结合域固定化的研究第11-13页
    1.2 L-氨基酸氧化酶第13-14页
    1.3 L-谷氨酸氧化酶简介与应用第14-18页
        1.3.1 L-谷氨酸第14-15页
        1.3.2 L-谷氨酸氧化酶的研究进展第15-17页
        1.3.3 L-谷氨酸氧化酶的应用第17-18页
    1.4 本论文研究的内容及意义第18-20页
        1.4.1 研究内容第18页
        1.4.2 研究意义第18-20页
2 材料与方法第20-37页
    2.1 实验材料第20-23页
        2.1.1 质粒与菌株第20页
        2.1.2 实验试剂第20页
        2.1.3 实验药品第20-21页
        2.1.4 实验仪器第21页
        2.1.5 培养基、抗生素及常用缓冲液的配制第21-23页
    2.2 试验方法第23-37页
        2.2.1 Gox重组质粒的构建第23-24页
        2.2.2 Gox-CBD原核表达载体的构建第24-29页
        2.2.3 Gox的表达与纯化第29-32页
        2.2.4 融合蛋白Gox-CBD的表达与纯化第32-33页
        2.2.5 蛋白浓度及融合蛋白结合量测定第33-34页
        2.2.6 L-谷氨酸氧化酶的酶学测定方法第34-35页
        2.2.7 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的测定第35页
        2.2.8 谷氨酸氧化酶的酶活性质研究第35页
        2.2.9 结合蛋白相关性质的测定方法第35-36页
        2.2.10 酶常数的测定第36页
        2.2.11 一步纯化法纯化Gox-CBD第36-37页
3 结果与讨论第37-56页
    3.1 Gox的重组蛋白的制备第37-42页
        3.1.1 pET-24a(+)-Gox重组质粒的构建第37页
        3.1.2 Gox重组蛋白的小量诱导表达第37-40页
        3.1.3 Gox重组蛋白的纯化第40-42页
    3.2 Gox-CBD重组蛋白的制备第42-45页
        3.2.1 Gox-CBD重组质粒的构建第42-43页
        3.2.2 Gox-CBD重组蛋白的诱导表达小试第43-45页
        3.2.3 Gox-CBD重组蛋白的获得第45页
    3.3 L-谷氨酸氧化酶的蛋白浓度及酶活测定第45-47页
        3.3.1 L-谷氨酸氧化酶的蛋白浓度测定第45-46页
        3.3.2 L-谷氨酸氧化酶的酶活测定第46-47页
    3.4 FAD对L-谷氨酸氧化酶酶活的影响第47页
    3.5 重组蛋白结合量的测定第47-48页
    3.6 Gox和Gox-CBD的酶活特性第48-51页
        3.6.1 pH对酶活性影响第48页
        3.6.2 最适反应温度和热稳定性第48-49页
        3.6.3 金属盐对酶活性的影响第49-50页
        3.6.4 酶的底物特异性第50-51页
    3.7 固定化酶结合稳定性及重复性操作的研究第51-53页
    3.8 K_m值的测定第53-54页
    3.9 一步纯化融合蛋白Gox-CBD第54-56页
4 结论第56-57页
5 展望第57-58页
6 参考文献第58-65页
7 攻读硕士学位期间发表论文情况第65-66页
8 致谢第66页

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