| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 酶与纺织业 | 第9-10页 |
| 1.1.1 纺织业的发展现状 | 第9页 |
| 1.1.2 酶在纺织中的应用 | 第9-10页 |
| 1.2 纤维素酶 | 第10-14页 |
| 1.2.1 纤维素 | 第10页 |
| 1.2.2 纤维素酶的分类与作用 | 第10-11页 |
| 1.2.3 纤维素酶的结构 | 第11页 |
| 1.2.4 GH45家族纤维素酶 | 第11-12页 |
| 1.2.5 GH5家族纤维素酶 | 第12-14页 |
| 1.3 基因发掘策略 | 第14页 |
| 1.3.1 质谱分析法 | 第14页 |
| 1.3.2 构建表达文库法 | 第14页 |
| 1.3.3 基因组测序分析法 | 第14页 |
| 1.3.4 简并引物法 | 第14页 |
| 1.4 表达系统简介 | 第14-18页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达系统概述 | 第15-16页 |
| 1.4.2 外源蛋白在毕赤酵母中的高效表达策略 | 第16-18页 |
| 1.5 研究意义及内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 实验仪器与试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.2 实验用菌株、质粒和引物 | 第22-25页 |
| 2.1.3 培养基和缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 GH45家族纤维素酶基因简并引物的设计 | 第26-27页 |
| 2.2.2 内蒙盐碱湖土壤真菌基因组DNA提取 | 第27页 |
| 2.2.3 GH45家族纤维素酶基因保守区域的克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.4 GH45家族纤维素酶基因全长序列的克隆 | 第29-32页 |
| 2.2.5 获取GH45家族纤维素酶基因的CDS | 第32-33页 |
| 2.2.6 粗糙脉孢菌GH45家族纤维素酶基因ncGH45的克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.7 密码子优化 | 第34-35页 |
| 2.2.8 GH45家族纤维素酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第35-36页 |
| 2.2.9 酶学性质测定 | 第36-38页 |
| 2.2.10 应用评价 | 第38页 |
| 2.2.11 对rNMgh45的改造 | 第38-39页 |
| 2.2.12 伴侣蛋白的共表达 | 第39页 |
| 2.2.13 培养条件优化 | 第39-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-63页 |
| 3.1 内蒙盐碱湖土壤宏基因组中GH45家族纤维素酶的获取 | 第41-45页 |
| 3.1.1 GH45家族纤维素酶基因保守区域的获得 | 第41-42页 |
| 3.1.2 GH45家族纤维素酶基因侧翼序列的获得 | 第42-43页 |
| 3.1.3 nmGH45基因序列的分析 | 第43-45页 |
| 3.2 粗糙脉孢菌GH45家族纤维素酶基因ncGH45的克隆 | 第45-47页 |
| 3.3 已知GH45家族纤维素酶的密码子优化 | 第47-49页 |
| 3.4 GH45家族纤维素酶在毕赤酵母中的外源表达 | 第49-50页 |
| 3.5 GH45家族纤维素酶酶学性质测定 | 第50-57页 |
| 3.5.1 GH45家族纤维素酶稳定性、最适pH及温度的测定 | 第50-53页 |
| 3.5.2 GH45家族纤维素酶对化学试剂的抗性 | 第53-56页 |
| 3.5.3 GH45家族纤维素酶底物特异性和动力学分析 | 第56页 |
| 3.5.4 GH45家族纤维素酶水解产物分析 | 第56-57页 |
| 3.5.5 GH45家族纤维素酶脱毛效果测定 | 第57页 |
| 3.6 rNMgh45在毕赤酵母中的高效表达 | 第57-61页 |
| 3.6.1 目的蛋白rNMgh45的改造 | 第57-58页 |
| 3.6.2 共表达伴侣蛋白 | 第58-60页 |
| 3.6.3 培养条件优化 | 第60-61页 |
| 3.7 小结 | 第61-63页 |
| 4 结论 | 第63-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-75页 |
| 7 论文发表情况 | 第75-76页 |
| 8 致谢 | 第76页 |
