| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 主要符号表 | 第20-21页 |
| 1 绪论 | 第21-45页 |
| 1.1 研究背景 | 第21-22页 |
| 1.2 蛋白质特异性荧光标记方法的研究进展 | 第22-28页 |
| 1.2.1 荧光蛋白 | 第22-23页 |
| 1.2.2 双砷-四半胱氨酸标签 | 第23-24页 |
| 1.2.3 SNAP/CLIP-tag | 第24-25页 |
| 1.2.4 ACP/MCP-tag | 第25页 |
| 1.2.5 HaloTag | 第25-26页 |
| 1.2.6 PYP-tag | 第26-27页 |
| 1.2.7 TMP-tag | 第27页 |
| 1.2.8 其它蛋白标签 | 第27-28页 |
| 1.3 蛋白标签特异性标记小分子生物应用研究进展 | 第28-43页 |
| 1.3.1 蛋白质合成、修饰与周转代谢研究 | 第28-30页 |
| 1.3.2 蛋白质构象与活性研究 | 第30-31页 |
| 1.3.3 蛋白质定位、转运与超分辨成像 | 第31-33页 |
| 1.3.4 蛋白质相互作用研究 | 第33-34页 |
| 1.3.5 蛋白质的操纵与控制 | 第34-36页 |
| 1.3.6 细胞器、细胞及活体标记成像 | 第36-38页 |
| 1.3.7 靶向荧光探针 | 第38-43页 |
| 1.4 研究思路 | 第43-45页 |
| 2 基于SNAP-tag标签的亚细胞蛋白质靶向一氧化氮荧光检测 | 第45-67页 |
| 2.1 引言 | 第45-47页 |
| 2.2 SNAP-tag靶向标记与NO检测策略设计 | 第47-48页 |
| 2.2.1 亚细胞SNAP-tag蛋白靶向NO探针标记策略 | 第47页 |
| 2.2.2 靶向标记NO探针TMR-NO-BG的检测原理 | 第47-48页 |
| 2.3 实验部分 | 第48-56页 |
| 2.3.1 仪器与试剂 | 第48-49页 |
| 2.3.2 SNAP-tag原核表达体系构建与蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 2.3.3 SNAP-tag标签蛋白体外标记TMR-NO-BG与光谱测试 | 第50-52页 |
| 2.3.4 SNAP-tag真核表达质粒的构建与细胞表达体系的建立 | 第52-55页 |
| 2.3.5 TMR-NO-BG对细胞的标记与成像 | 第55-56页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第56-66页 |
| 2.4.1 SNAP-tag原核表达体系构建与蛋白纯化 | 第56-57页 |
| 2.4.2 SNAP-tag标签蛋白体外标记TMR-NO-BG与光谱分析 | 第57-60页 |
| 2.4.3 SNAP-tag真核表达质粒的构建与细胞表达体系的建立 | 第60-61页 |
| 2.4.4 细胞内特异性标记TMR-NO-BG与外源NO检测 | 第61-63页 |
| 2.4.5 亚细胞标记TMR-NO-BG对诱导巨噬细胞内源NO的检测 | 第63-64页 |
| 2.4.6 亚细胞标记TMR-NO-BG对细胞凋亡过程NO的检测 | 第64-66页 |
| 2.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 3 基于SNAP-tag标签靶向BODIPY转子的蛋白微环境粘度检测 | 第67-85页 |
| 3.1 引言 | 第67-68页 |
| 3.2 SNAP-tag靶向蛋白标记与粘度检测策略设计 | 第68-70页 |
| 3.2.1 亚细胞SNAP-tag靶向粘度转子的标记策略设计 | 第68-69页 |
| 3.2.2 靶向标记BODIPY粘度转子的分子设计 | 第69-70页 |
| 3.3 实验部分 | 第70-73页 |
| 3.3.1 仪器与试剂 | 第70页 |
| 3.3.2 SNAP-tag体外标记的光谱测试与粘度响应分析 | 第70-71页 |
| 3.3.3 BDP-V BG标记细菌内SNAP-tag的荧光成像 | 第71-72页 |
| 3.3.4 BDP-V BG特异性标记真核细胞SNAP-tag的荧光成像 | 第72页 |
| 3.3.5 蛋白质标记BDP-VBG的荧光寿命成像与凋亡过程粘度检测 | 第72-73页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第73-84页 |
| 3.4.1 SNAP-tag标签蛋白体外标记BDP-V BG与光谱分析 | 第73-75页 |
| 3.4.2 探针的体外粘度响应 | 第75-76页 |
| 3.4.3 BDP-V BG标记细菌内SNAP-tag的荧光成像 | 第76页 |
| 3.4.4 BDP-V BG标记真核细胞SNAP-tag的荧光成像 | 第76-79页 |
| 3.4.5 亚细胞标记BDP-V BG的双光子荧光寿命成像及粘度测定 | 第79-81页 |
| 3.4.6 细胞凋亡过程组蛋白标记BDP-V BG的寿命成像与粘度测定 | 第81-84页 |
| 3.5 本章小结 | 第84-85页 |
| 4 基于SNAP-tag标签靶向萘酰亚胺的亚细胞双光子荧光成像 | 第85-100页 |
| 4.1 引言 | 第85-86页 |
| 4.2 SNAP-tag蛋白标记双光子萘酰亚胺策略设计 | 第86-87页 |
| 4.2.1 亚细胞SNAP-tag靶向双光子染料标记策略设计 | 第86-87页 |
| 4.2.2 SNAP-tag靶向标记萘酰亚胺的分子设计 | 第87页 |
| 4.3 实验部分 | 第87-90页 |
| 4.3.1 仪器与试剂 | 第87-88页 |
| 4.3.2 SNAP-tag标签蛋白体外标记与光谱测试 | 第88-89页 |
| 4.3.3 萘酰亚胺标记细胞内SNAP-tag与荧光成像 | 第89-90页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第90-99页 |
| 4.4.1 SNAP-tag蛋白体外标记萘酰亚胺的光谱分析 | 第90-92页 |
| 4.4.2 萘酰亚胺标记SNAP-tag蛋白的SDS-PAGE分析 | 第92-93页 |
| 4.4.3 萘酰亚胺标记SNAP-tag蛋白的效率与动力学分析 | 第93-94页 |
| 4.4.4 SNAP-tag蛋白体外标记萘酰亚胺的双光子吸收截面 | 第94页 |
| 4.4.5 萘酰亚胺标记细菌内SNAP-tag的荧光成像 | 第94-95页 |
| 4.4.6 萘酰亚胺标记真核细胞SNAP-tag的荧光成像 | 第95-97页 |
| 4.4.7 亚细胞标记ONI-BG的双光子荧光寿命成像 | 第97-98页 |
| 4.4.8 亚细胞标记ONI-BG的双光子激发多色成像 | 第98-99页 |
| 4.5 本章小结 | 第99-100页 |
| 5 串联EGFP与SNAP-tag标签应用于蛋白质动态变化的分析 | 第100-136页 |
| 5.1 引言 | 第100-102页 |
| 5.2 蛋白质串联标签标记与动态变化追踪研究策略设计 | 第102-105页 |
| 5.2.1 过氧化物酶体蛋白串联标签标记与动态变化追踪策略设计 | 第102-103页 |
| 5.2.2 自噬蛋白串联标签标记与动态变化追踪策略设计 | 第103-104页 |
| 5.2.3 蛋白质串联标签标记与周转代谢追踪策略设计 | 第104-105页 |
| 5.3 实验部分 | 第105-116页 |
| 5.3.1 仪器与试剂 | 第105-106页 |
| 5.3.2 EGFP-SNAP系列质粒构建 | 第106-111页 |
| 5.3.3 细胞核H2B蛋白靶向EGFP-SNAP质粒构建 | 第111-114页 |
| 5.3.4 细胞靶向表达串联标签体系的建立 | 第114-115页 |
| 5.3.5 蛋白质双标记与"脉冲-追踪"比率成像分析 | 第115-116页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第116-135页 |
| 5.4.1 EGFP-SNAP系列质粒构建 | 第116-117页 |
| 5.4.2 细胞核H2B蛋白靶向EGFP-SNAP质粒构建 | 第117-119页 |
| 5.4.3 串联蛋白标签追踪过氧化物酶体周转代谢研究 | 第119-121页 |
| 5.4.4 串联蛋白标签追踪自噬发生过程的研究 | 第121-124页 |
| 5.4.5 串联蛋白标签应用于蛋白质周转代谢研究的可行性 | 第124-128页 |
| 5.4.6 串联蛋白标签应用于组蛋白H2B周转代谢调控的研究 | 第128-135页 |
| 5.5 本章小结 | 第135-136页 |
| 6 结论与展望 | 第136-138页 |
| 6.1 结论 | 第136-137页 |
| 6.2 创新点 | 第137页 |
| 6.3 展望 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-149页 |
| 作者简介 | 第149页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第149-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
