| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 部分缩写词及符号说明表 | 第7-12页 |
| 一、文献综述 | 第12-19页 |
| 1 鸭甲肝病毒(DHAV)概述 | 第12-13页 |
| 1.1 DHAV的病原学特性 | 第12页 |
| 1.2 DHAV的分子生物学特征 | 第12-13页 |
| 2 DHAV VP1基因及VP1蛋白的研究进展 | 第13-14页 |
| 3 鸭甲肝病毒病原和抗体的诊断方法 | 第14-16页 |
| 3.1 根据临床症状和病理剖检病变诊断 | 第14-15页 |
| 3.2 血清学诊断 | 第15-16页 |
| 3.3 分子生物学诊断 | 第16页 |
| 4 免疫胶体金技术 | 第16-18页 |
| 4.1 基本原理 | 第17页 |
| 4.2 应用及发展前景 | 第17-18页 |
| 5 选题目的及意义 | 第18-19页 |
| 二、试验研究 | 第19-57页 |
| 1 材料 | 第19-22页 |
| 1.1 毒株、菌种、血清和试验动物 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.3 其他试验材料 | 第20页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2 主要仪器设备 | 第22页 |
| 3 试验方法 | 第22-33页 |
| 3.1 VP1基因和optiVP1的克隆、表达及纯化 | 第22-27页 |
| 3.1.1 VP1密码子偏嗜性及抗原表位分析 | 第22页 |
| 3.1.2 VP1密码子优化及基因合成 | 第22-23页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第23页 |
| 3.1.4 病毒总RNA的提取 | 第23页 |
| 3.1.5 VP1基因的RT-PCR扩增 | 第23-24页 |
| 3.1.6 VP1基因的T克隆 | 第24页 |
| 3.1.7 原核重组表达质粒的构建 | 第24-25页 |
| 3.1.8 目的蛋白的表达及纯化 | 第25-27页 |
| 3.2 鼠抗optiVP1蛋白血清的制备及应用 | 第27-28页 |
| 3.2.1 鼠抗重组蛋白高免血清的制备 | 第27页 |
| 3.2.2 基于鼠抗optiVP1血清的间接免疫荧光检测DHAV-1和DHAV-3 | 第27-28页 |
| 3.3 胶体金免疫层析试纸条的研制 | 第28-31页 |
| 3.3.1 抗原夹心法试纸条的研制 | 第28-30页 |
| 3.3.2 间接法试纸条的研制 | 第30页 |
| 3.3.3 试纸条性能评估 | 第30-31页 |
| 3.4 间接ELISA检测DHAV抗体 | 第31-32页 |
| 3.4.1 DHAV-1的增殖及纯化 | 第31页 |
| 3.4.2 间接ELISA检测DHAV抗体 | 第31-32页 |
| 3.4.3 临界值的确定 | 第32页 |
| 3.4.4 特异性试验 | 第32页 |
| 3.4.5 间接ELISA与金标试纸条符合率的评估 | 第32页 |
| 3.5 中和试验检测DHAV抗体 | 第32-33页 |
| 3.5.1 病毒TCID_(50)的测定 | 第32-33页 |
| 3.5.2 中和效价的测定 | 第33页 |
| 3.5.3 中和试验与金标试纸条灵敏度和符合率的比较 | 第33页 |
| 4 试验结果 | 第33-57页 |
| 4.1 VP1密码子偏嗜性分析及VP1密码子优化 | 第33-35页 |
| 4.1.1 VP1密码子偏嗜性及抗原表位分析 | 第33-34页 |
| 4.1.2 VP1密码子优化 | 第34-35页 |
| 4.2 VP1和optiVP1的克隆表达、鉴定及纯化 | 第35-40页 |
| 4.2.1 VP1的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 4.2.2 VP1基因的T克隆 | 第36-37页 |
| 4.2.3 VP1和optiVP1基因的亚克隆 | 第37页 |
| 4.2.4 重组蛋白的表达 | 第37-39页 |
| 4.2.5 重组蛋白optiVP1的纯化 | 第39-40页 |
| 4.3 鼠抗optiVP1蛋白血清的制备及运用 | 第40-41页 |
| 4.3.1 鼠抗optiVP1蛋白血清效价的测定 | 第40页 |
| 4.3.2 基于鼠抗optiVP1抗体的间接免疫荧光检测DHAV-1和DHAV-3 | 第40-41页 |
| 4.4 胶体金免疫层析试纸条的研制 | 第41-51页 |
| 4.4.1 双抗原夹心法试纸条的研制 | 第41-46页 |
| 4.4.2 间接法试纸条的研制 | 第46-47页 |
| 4.4.3 试纸条性能评价 | 第47-51页 |
| 4.5 间接ELISA检测DHAV抗体 | 第51-55页 |
| 4.5.1 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的摸索 | 第51-52页 |
| 4.5.2 酶标二抗的最佳稀释度 | 第52-53页 |
| 4.5.3 抗原的包被条件的优化 | 第53页 |
| 4.5.4 临界值的确定 | 第53-54页 |
| 4.5.5 特异性试验 | 第54页 |
| 4.5.6 胶体金试纸条和间接ELISA符合率的评估 | 第54-55页 |
| 4.6 中和试验检测DHAV抗体 | 第55-57页 |
| 4.6.1 病毒TCID_(50)的测定 | 第55-56页 |
| 4.6.2 中和效价的测定 | 第56页 |
| 4.6.3 中和试验与金标试纸条灵敏度和符合率的比较 | 第56-57页 |
| 三、讨论 | 第57-62页 |
| 1 optiVP1蛋白的原核表达、纯化及活性分析 | 第57-58页 |
| 2 双抗原夹心法与间接法试纸条检测DHAV抗体的优缺点 | 第58-59页 |
| 3 试纸条的保存及耗材的筛选 | 第59页 |
| 4 基于optiVP1蛋白的胶体金试纸条的研制 | 第59-62页 |
| 四、结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
