| 摘要 | 第1-6页 |
| SUMMARY | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| ·引言 | 第9-13页 |
| ·棉花生产种植现状及面临的问题 | 第9-10页 |
| ·干旱及盐碱对棉花的危害 | 第10页 |
| ·棉花抗旱、抗盐碱的相关研究进展 | 第10-13页 |
| ·ABA在植物生长发育及抗逆境响应中的作用 | 第13-14页 |
| ·ABA在植物生长发育中的作用 | 第13页 |
| ·ABA在植物逆境响应中的作用 | 第13-14页 |
| ·AREB/ABFs转录因子 | 第14-18页 |
| ·AREB/ABFs转录因子结构及分类 | 第15-16页 |
| ·AREB/ABFs转录因子的作用机理 | 第16-17页 |
| ·AREB/ABFs转录因子的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·棉花AREB/ABFs类转录因子的相关研究 | 第18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 棉花GhABF1及Gh ABF4转录因子基因克隆及其序列分析 | 第19-32页 |
| ·前言 | 第19页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·材料与试剂 | 第19-21页 |
| ·仪器与设备 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-27页 |
| ·Gh ABF1和GhABF4转录因子基因的扩增 | 第21-24页 |
| ·棉花材料的准备 | 第21页 |
| ·棉花总RNA的提取及cDNA的合成 | 第21-23页 |
| ·引物与模板 | 第23页 |
| ·棉花Gh ABF1、Gh ABF4基因的扩增及产物纯化 | 第23-24页 |
| ·Gh ABF1、GhABF4与T载体连接及阳性克隆筛选 | 第24-26页 |
| ·序列测定 | 第26页 |
| ·序列分析 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·棉花RNA的提取和Gh ABF1和Gh ABF4基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·棉花Gh ABF1和Gh ABF4的生物信息分析 | 第28-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 VIGS沉默Gh ABF1和Gh ABF4对棉花抗逆性的影响 | 第32-47页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·材料与试剂 | 第32页 |
| ·仪器与设备 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·Gh ABF1和Gh ABF4基因片段的扩增及酶切 | 第33-34页 |
| ·引物与模板 | 第33页 |
| ·GhABF1和GhABF4基因片段的扩增、回收及酶切 | 第33-34页 |
| ·pYL-156载体的酶切及产物回收 | 第34页 |
| ·目的基因片段与干涉载体pYL-156的连接及阳性克隆的筛选 | 第34-36页 |
| ·农杆菌GV3010的转化 | 第36-38页 |
| ·农杆菌GV3101感受态的制备 | 第36-37页 |
| ·农杆菌GV3101的转化 | 第37页 |
| ·农杆菌工程菌的制备及注射 | 第37-38页 |
| ·VIGS沉默目的基因植株抗逆性检测 | 第38-39页 |
| ·VIGS沉默目的基因植株复水率测定 | 第38页 |
| ·离体叶片脱水速率检测 | 第38-39页 |
| ·叶片导电率的测定 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-46页 |
| ·Gh ABF1和Gh ABF4基因片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·病毒干扰载体pYL156-Gh ABF1和pYL156-Gh ABF4的构建及酶切检测 | 第40-41页 |
| ·VIGS沉默目的基因植株的抗逆性检测 | 第41-45页 |
| ·VIGS沉默目的基因植株复水率测定 | 第41-43页 |
| ·离体叶片脱水速率检测 | 第43-44页 |
| ·叶片导电率的测定 | 第44-45页 |
| ·GhABF1和GhABF4沉默效果的PCR检测 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 GhABF1和Gh ABF4的亚细胞定位 | 第47-53页 |
| ·前言 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·材料与试剂 | 第47页 |
| ·仪器与设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·植物材料的准备 | 第47-48页 |
| ·亚细胞定位工程菌的制备 | 第48-50页 |
| ·引物设计及带酶切位点的目的基因获得 | 第48-49页 |
| ·带酶切位点的基因及载体的酶切与回收 | 第49页 |
| ·目的基因与亚细胞定位载体EGFP的连接 | 第49页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第49页 |
| ·重组质粒的提取、酶切检测及测序 | 第49页 |
| ·农杆菌GV3101的转化 | 第49页 |
| ·亚细胞定位工程菌制备及在烟草叶片中的瞬时表达 | 第49-50页 |
| ·亚细胞定位的观测 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-52页 |
| ·亚细胞定位载体pEGFP-Gh ABF和pEGFP-Gh ABF4的构建 | 第50-51页 |
| ·Gh ABF1和GhABF4亚细胞定位 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 Gh ABF1真核表达载体构建及烟草遗传转化 | 第53-63页 |
| ·前言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·仪器与设备 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·植物材料的准备 | 第54页 |
| ·LBA4404工程菌的制备 | 第54-56页 |
| ·引物设计及带酶切位点的Gh ABF1扩增 | 第54页 |
| ·带酶切位点的基因及载体的的酶切与回收 | 第54页 |
| ·目的基因与p Bin438的连接 | 第54页 |
| ·大肠杆菌转化及阳性克隆的筛选 | 第54页 |
| ·重组质粒的提取、酶切检测及测序 | 第54-55页 |
| ·农杆菌LBA4404的转化 | 第55页 |
| ·工程菌的制备及烟草转化 | 第55页 |
| ·转基因烟草的筛选 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草植株抗逆检测 | 第56-57页 |
| ·离体叶片脱水速率检测 | 第56页 |
| ·叶片导电率的测定 | 第56-57页 |
| ·可溶蛋白的测定 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-61页 |
| ·重组质粒Gh ABF1-p Bin438的酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·转基因烟草的诱导及筛选 | 第58-59页 |
| ·叶片相对电导率的测定 | 第59页 |
| ·离体叶片失水速率测定 | 第59-60页 |
| ·可溶蛋白含量的测定 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 司怀军导师简介 | 第73-74页 |
| 吴家和导师简介 | 第74-75页 |
