| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-26页 |
| ·SAM的背景 | 第12-14页 |
| ·SAM的概况 | 第12-13页 |
| ·SAM的代谢途径 | 第13-14页 |
| ·SAM的研究进展 | 第14-18页 |
| ·SAM的生物学功能 | 第14页 |
| ·转甲基作用 | 第14页 |
| ·转氨丙基作用 | 第14页 |
| ·转硫作用 | 第14页 |
| ·SAM的应用 | 第14-16页 |
| ·SAM在肝病治疗中的作用 | 第15页 |
| ·SAM在抑郁症治疗中的作用 | 第15-16页 |
| ·SAM在关节炎治疗中的作用 | 第16页 |
| ·SAM的制备方法 | 第16-18页 |
| ·化学合成法 | 第16页 |
| ·酶促转化法 | 第16-17页 |
| ·发酵法 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·重组大肠杆菌的高密度发酵 | 第19-24页 |
| ·宿主菌 | 第19页 |
| ·质粒载体 | 第19-20页 |
| ·培养条件 | 第20-22页 |
| ·营养物质 | 第20页 |
| ·条件的控制 | 第20-22页 |
| ·补料调控 | 第22-23页 |
| ·生长抑制因子 | 第23-24页 |
| ·乙酸的积累 | 第23-24页 |
| ·CO_2的积累 | 第24页 |
| ·研究目的及意义 | 第24页 |
| ·研究思路 | 第24-25页 |
| ·metK基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·S-腺苷蛋氨酸高产菌株的构建 | 第25页 |
| ·摇瓶发酵响应面优化培养基 | 第25页 |
| ·高密度发酵初步探索 | 第25页 |
| ·研究路线 | 第25-26页 |
| 第2章 重组载体的构建与筛选 | 第26-44页 |
| ·材料与仪器 | 第26-27页 |
| ·菌株和载体 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·主要仪器和设备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·metK基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增体系和扩增程序 | 第28页 |
| ·重组载体pET-28a-metK的构建 | 第28-29页 |
| ·pET-28a和metK基因的双酶切 | 第28-29页 |
| ·pET-28a和metK基因的连接 | 第29页 |
| ·重组载体pET-28a-metK的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组载体pET-28a-metK的提取 | 第30页 |
| ·重组载体pET-28a-metK的鉴定 | 第30页 |
| ·测序鉴定 | 第30页 |
| ·重组载体pET-32a-metK的构建 | 第30-31页 |
| ·pET-32a和metK基因的双酶切 | 第30页 |
| ·pET-32a和metK基因的连接 | 第30-31页 |
| ·重组载体pET-32a-metK的鉴定 | 第31页 |
| ·重组载体pET-32a-metK的提取 | 第31页 |
| ·重组载体pET-32a-metK的鉴定 | 第31页 |
| ·测序鉴定 | 第31页 |
| ·两种BL21重组菌中metK基因的诱导表达鉴定 | 第31-32页 |
| ·两种BL21重组菌的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·两种BL21重组菌的蛋白电泳鉴定 | 第32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-43页 |
| ·质粒提取 | 第32-33页 |
| ·metK基因的获取 | 第33-34页 |
| ·两种载体与metK基因的双酶切 | 第34-35页 |
| ·pET-28a与metK基因的双酶切 | 第34页 |
| ·pET-32a与metK基因的双酶切 | 第34-35页 |
| ·两种重组载体的构建 | 第35-38页 |
| ·重组载体pET-28a-metK的构建 | 第35-36页 |
| ·重组载体pET-32a-metK的构建 | 第36-38页 |
| ·两种重组载体的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组载体pET-28a-metK的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组载体pET-32a-metK的筛选与鉴定 | 第39页 |
| ·两种重组载体的测序结果分析 | 第39-41页 |
| ·重组载体pET-28a-metK的测序结果分析 | 第39-40页 |
| ·重组载体pET-32a-metK的测序结果分析 | 第40-41页 |
| ·两种BL21重组菌的蛋白电泳结果 | 第41-43页 |
| ·本章小节 | 第43-44页 |
| 第3章 高产菌株的筛选与培养基的优化 | 第44-64页 |
| ·材料与仪器 | 第44-45页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-49页 |
| ·两种重组菌发酵生产SAM | 第45页 |
| ·通过HPLC测定SAM的产量 | 第45-46页 |
| ·培养基成分的优化 | 第46-47页 |
| ·生长曲线的确定 | 第46页 |
| ·SAM高产菌株的筛选 | 第46页 |
| ·碳源种类和浓度的筛选 | 第46-47页 |
| ·有机氮源种类和浓度的筛选 | 第47页 |
| ·无机氮源种类的浓度和筛选 | 第47页 |
| ·磷酸盐浓度的筛选 | 第47页 |
| ·硫酸镁浓度的筛选 | 第47页 |
| ·底物浓度的筛选 | 第47页 |
| ·培养条件的优化 | 第47-48页 |
| ·诱导温度对发酵的影响 | 第47页 |
| ·培养基初始pH对发酵的影响 | 第47-48页 |
| ·接种量对发酵的影响 | 第48页 |
| ·转速对发酵的影响 | 第48页 |
| ·装液量对发酵的影响 | 第48页 |
| ·响应面优化培养基 | 第48-49页 |
| ·P-B实验设计 | 第48页 |
| ·最陡爬坡实验设计 | 第48-49页 |
| ·响应面实验设计 | 第49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-63页 |
| ·SAM的标准曲线 | 第49-50页 |
| ·生长曲线 | 第50-51页 |
| ·SAM高产菌株的筛选 | 第51页 |
| ·培养基成分的优化结果 | 第51-56页 |
| ·碳源种类和浓度的筛选结果 | 第51-53页 |
| ·氮源种类和浓度的筛选结果 | 第53-54页 |
| ·磷酸盐对产量的影响 | 第54-55页 |
| ·硫酸镁浓度的筛选结果 | 第55页 |
| ·底物浓度的筛选结果 | 第55-56页 |
| ·培养条件的优化结果 | 第56-58页 |
| ·诱导温度的确定 | 第56页 |
| ·培养基初始pH的确定 | 第56-57页 |
| ·接种量的确定 | 第57页 |
| ·转速的确定 | 第57-58页 |
| ·装液量的确定 | 第58页 |
| ·响应面优化的结果 | 第58-63页 |
| ·P-B实验优化结果 | 第58-59页 |
| ·最陡爬坡实验优化结果 | 第59-60页 |
| ·Box-Behnken Design实验优化结果 | 第60-63页 |
| ·本章小节 | 第63-64页 |
| 第4章 重组菌ZJGS-SAM高密度发酵的初步探索 | 第64-72页 |
| ·材料与仪器 | 第64-65页 |
| ·菌株 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64页 |
| ·主要仪器设备 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-66页 |
| ·分批发酵培养 | 第65页 |
| ·pH对生长和发酵的影响 | 第65页 |
| ·通气量的选择 | 第65页 |
| ·分批补料发酵 | 第65-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-70页 |
| ·分批发酵培养 | 第66-68页 |
| ·pH的控制对重组菌的生长和产量的影响 | 第66-67页 |
| ·通气量的确定 | 第67-68页 |
| ·分批补料发酵 | 第68-70页 |
| ·本章小节 | 第70-72页 |
| 第5章 结论与展望 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·两种重组载体的成功构建 | 第72页 |
| ·ZJGS-SAM的筛选和培养基的优化 | 第72页 |
| ·重组菌高密度发酵的初步探索 | 第72-73页 |
| ·创新点 | 第73页 |
| ·不足与建议 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |