| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-26页 |
| ·大黄鱼简介及其病害 | 第13-14页 |
| ·养殖鱼类主要病害 | 第13-14页 |
| ·生物体的抗氧化系统 | 第14-20页 |
| ·超氧化物歧化酶 | 第15-16页 |
| ·过氧化氢酶 | 第16页 |
| ·硫氧还原蛋白 | 第16页 |
| ·谷胱甘肽系统 | 第16-17页 |
| ·过氧化物酶(Peroxiredoxin)家族 | 第17-20页 |
| ·酵母双杂交 | 第20-22页 |
| ·酵母双杂交概述 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交作用原理 | 第21-22页 |
| ·酵母双杂交系统的优缺点 | 第22页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第22-23页 |
| ·启动子概述 | 第23-24页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第2章 大黄鱼过氧化物酶IV在HEK-293T细胞中的表达与抗氧化活性测定 | 第26-41页 |
| ·实验材料 | 第26-30页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26-27页 |
| ·酶类以及主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要引物合成 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·常用培养基和溶液 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-36页 |
| ·高糖DMEM培养基的配制 | 第30页 |
| ·细胞传代培养 | 第30页 |
| ·细胞冻存 | 第30-31页 |
| ·细胞复苏 | 第31页 |
| ·Trizol法提总RNA | 第31页 |
| ·RNA中基因组DNA的消化去除 | 第31-32页 |
| ·逆转录反应 | 第32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·制备大肠杆菌E.coli感受态细胞 | 第33-34页 |
| ·连接反应 | 第34页 |
| ·转化及菌落PCR的筛选 | 第34页 |
| ·去内毒素试剂盒抽提质粒DNA | 第34-35页 |
| ·质粒DNA转染HEK-293T细胞 | 第35-36页 |
| ·细胞裂解 | 第36页 |
| ·Western blot | 第36页 |
| ·重组蛋白Lyc-PrxIV在HEK-293T细胞中的抗氧化活性分析 | 第36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·大黄鱼脾脏cDNA的制备及Lyc-PrxIV目的片段的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pCMV-Lyc-PrxIV的构建 | 第37-38页 |
| ·Lyc-PrxIV在HEK-293T细胞中的表达 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白Lyc- PrxIV在HK-293T细胞中的抗氧化活性分析 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第3章 大黄鱼过氧化物酶IV互作蛋白筛选及验证 | 第41-54页 |
| ·实验材料 | 第41-45页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·菌株和质粒 | 第41-43页 |
| ·酶类以及主要试剂 | 第43页 |
| ·主要引物合成 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·常用培养基和溶液 | 第43-45页 |
| ·试验方法 | 第45-48页 |
| ·表达载体的构建 | 第45页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·诱饵质粒DNA的转化 | 第45页 |
| ·诱饵质粒DNA在酵母菌株中自激活检测 | 第45-46页 |
| ·酵母双杂交文库转化和筛选 | 第46页 |
| ·X-gal显色实验 | 第46页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·细胞转染 | 第47页 |
| ·细胞裂解 | 第47页 |
| ·免疫共沉淀 | 第47页 |
| ·Western blot | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-52页 |
| ·诱饵质粒的毒性及自激活检测 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第49-50页 |
| ·免疫共沉淀 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第4章 大黄鱼过氧化物酶IV启动子活性分析 | 第54-68页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·实验动物 | 第54页 |
| ·菌株、载体和细胞 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·引物合成 | 第55-56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·常用溶液和培养基 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·用Genome Walker试剂盒扩增Lyc-PrxIV的 5’调控序列 | 第56-59页 |
| ·构建含Lyc-PrxIV的 5’调控序列和报告基因的重组质粒 | 第59页 |
| ·Lyc-PrxIV的 5’调控序列的活性验证 | 第59-60页 |
| ·Lyc-PrxIV启动子的免疫刺激分析 | 第60页 |
| ·Lyc-PrxIV启动子的删除截短活性分析 | 第60-61页 |
| ·数据分析 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-66页 |
| ·用Genome Walker试剂盒扩增Lyc-PrxIV的 5’调控序列 | 第61-63页 |
| ·Lyc-PrxIV的 5’调控序列活性分析 | 第63-64页 |
| ·Lyc-PrxIV启动子对免疫刺激的响应分析 | 第64页 |
| ·不同长度Lyc-PrxIV启动子活性分析 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第5章 总结与展望 | 第68-69页 |
| ·总结 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第82页 |
