采用iTRAQ技术对香蕉在枯萎病诱导下差异蛋白质表达谱的研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·香蕉枯萎病概况 | 第11-12页 |
| ·蛋白质组学简介 | 第12-19页 |
| ·iTRAQ技术简介 | 第13-16页 |
| ·双向电泳技术简介 | 第16-17页 |
| ·质谱技术简介 | 第17页 |
| ·生物信息学分析技术 | 第17-19页 |
| ·研究目的与技术路线 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-32页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·仪器与试剂 | 第20-22页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·培养基及试剂 | 第20-22页 |
| ·香蕉枯萎病菌的离体叶片接种 | 第22页 |
| ·病原真菌的菌丝培养 | 第22页 |
| ·病原真菌的分生孢子培养 | 第22页 |
| ·香蕉的病原菌接种和取样 | 第22-23页 |
| ·香蕉叶片的蛋白质提取与双向电泳 | 第23-26页 |
| ·叶片取样及处理 | 第23页 |
| ·蛋白质提取 | 第23-24页 |
| ·蛋白样品的定量 | 第24页 |
| ·水化上样 | 第24页 |
| ·等电聚焦 | 第24-25页 |
| ·IPG胶条平衡 | 第25页 |
| ·二向SDS-PAGE电泳 | 第25-26页 |
| ·凝胶染色 | 第26页 |
| ·iTRAQ操作流程 | 第26-29页 |
| ·蛋白质提取过程 | 第26-27页 |
| ·蛋白质浓度测量 | 第27页 |
| ·SDS电泳 | 第27页 |
| ·蛋白质酶解 | 第27页 |
| ·iTRAQ标记 | 第27页 |
| ·用SCX分离 | 第27页 |
| ·基于QE的液质联用分析 | 第27-29页 |
| ·香蕉叶片的总RNA提取 | 第29-30页 |
| ·试验准备 | 第29页 |
| ·香蕉叶片总RNA提取方法 | 第29-30页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第30-32页 |
| ·反转录合成cDNA | 第30-31页 |
| ·PCR引物设计 | 第31页 |
| ·半定量RT-PCR反应体系及程序 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-53页 |
| ·香蕉叶片的枯萎病菌接种 | 第32页 |
| ·香蕉叶片蛋白质的双向电泳 | 第32-35页 |
| ·蛋白质的浓度鉴定 | 第32-33页 |
| ·通过SDS-PAGE鉴定蛋白质量 | 第33-34页 |
| ·双向电泳实验 | 第34-35页 |
| ·香蕉叶片蛋白质的iTRAQ测序结果 | 第35-50页 |
| ·蛋白质谱鉴定的统计结果 | 第35-36页 |
| ·肽段匹配误差分布 | 第36-37页 |
| ·Unique肽段数量分布 | 第37-38页 |
| ·肽段序列覆盖度 | 第38页 |
| ·GO功能聚类分析和COG注释分析 | 第38-41页 |
| ·定量信息统计 | 第41-44页 |
| ·蛋白功能聚类分析 | 第44-45页 |
| ·Pathway显著性富集分析 | 第45-47页 |
| ·植物病理相关代谢途径 | 第47-50页 |
| ·半定量RT-PCR验证 | 第50-53页 |
| ·RNA质量验证 | 第50页 |
| ·RT-PCR验证 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-58页 |
| ·蛋白质组学研究技术的比较 | 第53页 |
| ·植物与病原菌互作通路分析 | 第53-54页 |
| ·植物激素信号转导通路分析 | 第54-55页 |
| ·病原菌互作与激素信号转导的协同分析 | 第55页 |
| ·病理相关蛋白的分子机制 | 第55-57页 |
| ·蛋白质组与基因组的验证 | 第57页 |
| ·本实验后续工作计划 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录 | 第67-84页 |
| 攻读硕士期间发表或者待发表的文章 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
