| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-34页 |
| ·膜联蛋白A2 | 第14-29页 |
| ·annexins家族 | 第14-16页 |
| ·膜联蛋白A2在肿瘤中的生物学特性 | 第16-29页 |
| ·基因敲除 | 第29-34页 |
| ·基因敲除的现状 | 第30-31页 |
| ·基因敲除在在肿瘤侵袭和转移相关基因的应用 | 第31-34页 |
| 第2章 本课题的研究内容及意义、技术路线与创新点 | 第34-36页 |
| 第3章 ANXA2基因敲除重组子的设计、构建 | 第36-52页 |
| ·实验材料 | 第36-38页 |
| ·质粒和细胞 | 第36页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第36-38页 |
| ·主要试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-45页 |
| ·基因敲除重组子的设计 | 第39-40页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·转化 | 第40-41页 |
| ·PCR反应 | 第41页 |
| ·酶切和胶回收 | 第41-42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·重组子的制备 | 第42-43页 |
| ·Caco2基因组的提取 | 第43-44页 |
| ·细胞培养 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-48页 |
| ·Caco2细胞基因组产物的凝胶分析 | 第45-46页 |
| ·ANXA2基因敲除重组子的构建和检测 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-52页 |
| 第4章 ANXA2~(-/-)Caco2细胞系的建立 | 第52-62页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·细胞株及基因敲除重组子 | 第52页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂的配制 | 第52-54页 |
| ·实验方法及步骤 | 第54-58页 |
| ·细胞培养 | 第54页 |
| ·质粒线性化 | 第54页 |
| ·细胞电穿孔 | 第54-55页 |
| ·细胞抗性筛选 | 第55页 |
| ·GFP表达的检测 | 第55页 |
| ·有限稀释法 | 第55页 |
| ·PCR检测ANXA2敲除 | 第55-56页 |
| ·Western Blot检测ANXA2敲除 | 第56-58页 |
| ·实验结果 | 第58-61页 |
| ·GFP表达的检测 | 第58-59页 |
| ·PCR检测ANXA2基因的敲除 | 第59-60页 |
| ·Western Blot检测ANXA2敲除 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第5章 ANXA2表达对Caco2细胞结构的电镜研究 | 第62-68页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·细胞株 | 第62页 |
| ·主要试剂及设备 | 第62页 |
| ·主要试剂配置 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·扫描电镜样品的制备 | 第63页 |
| ·透射电镜样品的制备 | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-65页 |
| ·扫描电镜样品的观察 | 第63-65页 |
| ·透射电镜样品的观察 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 第6章 ANXA2表达对Caco2细胞行为的调节的研究 | 第68-78页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·细胞株 | 第68页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第68页 |
| ·主要试剂的配制 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-70页 |
| ·细胞培养 | 第69页 |
| ·实验分组 | 第69页 |
| ·细胞增殖分析 | 第69页 |
| ·细胞迁移分析 | 第69页 |
| ·Hoechst33258染色 | 第69-70页 |
| ·MitoView633~(TM)结合DAPI检测细胞凋亡 | 第70页 |
| ·实验结果 | 第70-74页 |
| ·细胞增殖 | 第70-71页 |
| ·细胞迁移 | 第71-72页 |
| ·细胞凋亡 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-78页 |
| 总结 | 第78-82页 |
| 附录 | 第82-112页 |
| 一、参考文献 | 第82-98页 |
| 二、人ANXA2三个变异体的内含子和外显子长度 | 第98-99页 |
| 三、三个变异体的ORF的序列比对 | 第99-105页 |
| 四、外显子6插入位点前(3500BP)、后(3629BP)同源臂 | 第105-109页 |
| 五、插入片段的限制性内切酶位点分析 | 第109-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 | 第114页 |
