| 前言 | 第1-14页 |
| 中文摘要 | 第14-20页 |
| Abstract | 第20-36页 |
| 引言 | 第36-38页 |
| 第一部分 应用二维色谱、质谱联用技术对大肠癌与癌旁组织的差蛋白质组学研究 | 第38-64页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| ·材料与试剂 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-40页 |
| ·临床样本取材 | 第39页 |
| ·样品总蛋白提取及蛋白浓度测定 | 第39页 |
| ·样品蛋白水解多肽混合物的制备 | 第39-40页 |
| ·二维色谱与质谱联用分离并鉴定多肽混合物 | 第40页 |
| 2 实验结果 | 第40-62页 |
| ·肿瘤组织总蛋白酶解混合物的二维色谱与质谱联用分析 | 第40页 |
| ·癌旁组织总蛋白酶解混合物的二维色谱与质谱联用分析 | 第40页 |
| ·肿瘤与癌旁组织差异蛋白质的质谱分析 | 第40-44页 |
| ·上调蛋白POSTN鉴定质谱数据 | 第44-62页 |
| ·POSTN（Isoform 1 of Periostin）蛋白质谱鉴定结果 | 第44-46页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：IMGDKVASEALMK序列肽段的鉴定数据 | 第46-48页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：TTVLYECCPGYMR序列肽段的鉴定数据 | 第48-50页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：GCPAVLPIDHVYGTLGIVGATTTQR序列肽段的鉴定数据 | 第50-52页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：VGLNELYNGQILETIGGK序列肽段的鉴定数据 | 第52-54页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：AAAITSDILEALGRDGHFTLFAPTNEAFEKLPR序列肽段的鉴定数据 | 第54-56页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：DIVTNNGVIHLIDQVLIPDSAK序列肽段的鉴定数据 | 第56-58页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：VLTQIGTSIQDFIEAEDDLSSFR序列肽段的鉴定数据 | 第58-60页 |
| ·POSTN蛋白的质谱鉴定：SKESDIMTTNGVIHVVDKLLYPADTPVGNDQLLEILNK序列肽段的鉴定数据 | 第60-62页 |
| 3 小结 | 第62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第二部分 大肠癌病人血清POSTN水平与临床病理参数之间的关系 | 第64-72页 |
| 1 材料和方法 | 第64-67页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·血液标本来源与保存 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-67页 |
| ·临床病理资料数据库的建立 | 第64-66页 |
| ·ELISA法血清测定POSTN | 第66-67页 |
| ·统计学分析 | 第67页 |
| 2 结果 | 第67-69页 |
| ·大肠癌病人血清中POSTN水平 | 第67-68页 |
| ·血清POSTN水平与大肠癌临床病理学特征的关系 | 第68-69页 |
| 3 小结 | 第69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 第三部分 POSTN 基因在大肠癌细胞系sw480中的表达及功能研究 | 第72-84页 |
| 一、 POSTN蛋白在大肠癌细胞系sw480中的表达 | 第72-75页 |
| 1 材料与方法 | 第72-74页 |
| ·主要仪器和设备 | 第72页 |
| ·主要试剂及配制 | 第72-74页 |
| ·主要试剂 | 第72-73页 |
| ·主要试剂配制 | 第73-74页 |
| ·10×D-Hank’s 配制 | 第73页 |
| ·0.25% 胰蛋白酶配制 | 第73页 |
| ·PBS配制 | 第73页 |
| ·DMEM高糖培养基配制 | 第73-74页 |
| 2、实验方法 | 第74-75页 |
| ·细胞培养 | 第74页 |
| ·免疫荧光染色 | 第74-75页 |
| 二、POSTN siRNA 表达载体的构建和质粒扩增 | 第75-79页 |
| 1、材料及试剂配制 | 第75页 |
| ·主要仪器和设备 | 第75页 |
| ·主要试剂及配制 | 第75页 |
| 2、实验步骤及方法 | 第75-79页 |
| ·POSTN siRNA载体设计 | 第75-76页 |
| ·载体构建 | 第76页 |
| ·质粒的大量提取 | 第76-77页 |
| ·质粒转染及sw480细胞的转染效率的观察 | 第77-79页 |
| ·细胞培养 | 第77-78页 |
| ·细胞转染 | 第78-79页 |
| 三、结果 | 第79-82页 |
| 1、 POSTN基因在大肠癌细胞系sw480中的表达 | 第79-80页 |
| ·光镜下sw480的形态特征 | 第79页 |
| ·免疫荧光结果 | 第79-80页 |
| 2、 POSTN siRNA 表达载体的构建和质粒扩增 | 第80-82页 |
| ·提取质粒浓度的测定 | 第80页 |
| ·观察 | 第80-82页 |
| 四、小结 | 第82页 |
| 五、讨论 | 第82-84页 |
| 第四部分 POSTN siRNA转染对人大肠癌细胞生物学行为的影响 | 第84-116页 |
| 一、 POSTN siRNA转染对sw480细胞POSTN mRNA转录的影响 | 第84-88页 |
| 1、材料 | 第84-85页 |
| ·主要仪器和设备 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84-85页 |
| 2、实验方法 | 第85-87页 |
| ·细胞总RNA分离 | 第85页 |
| ·逆转录（cDNA的合成） | 第85-86页 |
| ·Real-Time PCR | 第86-87页 |
| 3、统计学方法 | 第87-88页 |
| 二、 POSTN siRNA转染对sw480细胞表达POSTN蛋白的影响 | 第88-90页 |
| 1、材料 | 第88页 |
| ·、主要仪器和设备 | 第88页 |
| ·、主要试剂 | 第88页 |
| 2、实验方法 | 第88-90页 |
| ·实验分组 | 第88-89页 |
| ·免疫荧光染色 | 第89-90页 |
| 三、 POSTN RNAi对sw480细胞凋亡的影响 | 第90-92页 |
| 1 材料 | 第90页 |
| ·主要仪器和设备 | 第90页 |
| ·主要试剂 | 第90页 |
| 2 实验方法 | 第90-91页 |
| ·实验分组 | 第91页 |
| ·凋亡检测 | 第91页 |
| 3 统计学方法 | 第91-92页 |
| 四、POSTN siRNA 转染后sw480 细胞的亚细胞结构改变 | 第92-94页 |
| 1 材料和方法 | 第92页 |
| ·主要设备和仪器 | 第92页 |
| ·主要试剂 | 第92页 |
| 2 实验方法 | 第92-94页 |
| ·实验分组 | 第92页 |
| ·电镜样本制作 | 第92-94页 |
| 五、POSTN RNAi对sw480细胞增殖和细胞周期的影响 | 第94-96页 |
| 1 仪器和试剂 | 第94-95页 |
| ·主要仪器和设备 | 第94页 |
| ·主要试剂 | 第94-95页 |
| 2.实验步骤及方法 | 第95页 |
| ·细胞增殖实验cck8法 | 第95页 |
| ·细胞周期检测 | 第95页 |
| 3 统计学方法 | 第95-96页 |
| 六、结果 | 第96-111页 |
| 1 POSTN siRNA转染对sw480细胞POSTN mRNA转录的影响 | 第96-98页 |
| ·组织总RNA分离结果 | 第96页 |
| ·POSTN siRNA转染对sw480细胞POSTN基因转录的影响 | 第96-98页 |
| 2、POSTN siRNA转染对sw480细胞表达POSTN蛋白的影响 | 第98-101页 |
| 3、 POSTN RNAi对sw480细胞凋亡的影响 | 第101-103页 |
| 4、 POSTN siRNA转染后SW480细胞的亚细胞结构改变 | 第103-105页 |
| 5、 POSTN RNAi对sw480细胞增殖和细胞周期的影响 | 第105-111页 |
| ·POSTN siRNA对sw480细胞增殖的影响 | 第105-107页 |
| ·POSTN siRNA对sw480细胞周期的影响 | 第107-111页 |
| 七、小结 | 第111页 |
| 八、讨论 | 第111-116页 |
| 第五部分 结论 | 第116-118页 |
| 文献综述 POSTN蛋白与肿瘤的发生 | 第118-122页 |
| 摘要 | 第118页 |
| 1 POSTN 的分子结构 | 第118页 |
| 2 POSTN 的主要功能 | 第118-119页 |
| 3 POSTN 与肿瘤 | 第119-122页 |
| 参考文献 | 第122-134页 |
| 作者简介 | 第134-136页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
