| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 縮略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-28页 |
| 1 哺乳动物体细胞核移植表观遗传修饰研究进展 | 第13-22页 |
| ·体细胞核移植技术与表观遗传修饰概述 | 第13-14页 |
| ·胚胎早期发育重编程 | 第14-15页 |
| ·基因组印记 | 第15-16页 |
| ·X染色体失活 | 第16-17页 |
| ·染色质重塑 | 第17页 |
| ·组蛋白修饰 | 第17-18页 |
| ·DNA甲基化 | 第18-22页 |
| ·DNA甲基化概述 | 第18-19页 |
| ·DNA甲基化转移酶Ⅰ | 第19-20页 |
| ·DNA甲基化转移酶Ⅱ | 第20-21页 |
| ·DNA甲基化转移酶Ⅲ | 第21-22页 |
| 2 影响体细胞核移植效率的因素 | 第22-25页 |
| ·供体细胞的选择 | 第22-24页 |
| ·供体细胞的类型与形态 | 第22-23页 |
| ·供体细胞的代次 | 第23页 |
| ·供体细胞的周期 | 第23-24页 |
| ·供体细胞的年龄 | 第24页 |
| ·受体细胞的选择 | 第24-25页 |
| 3 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 | 第25-27页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二章 5-氮-2’-脱氧胞苷对胎牛成纤维细胞的影响 | 第28-45页 |
| 1 材料和方法 | 第28-31页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·主要分子生物学软件及数据库 | 第30-31页 |
| ·主要生物学软件 | 第30-31页 |
| ·主要数据库与网站 | 第31页 |
| 2 胎牛成纤维细胞的准备和处理 | 第31-37页 |
| ·胎牛成纤维细胞系的建立 | 第31-32页 |
| ·胎牛成纤维细胞的制备与纯化 | 第31页 |
| ·胎牛成纤维细胞的传代培养 | 第31-32页 |
| ·胎牛成纤维细胞的冻存 | 第32页 |
| ·胎牛成纤维细胞的复苏 | 第32页 |
| ·细胞增殖-毒性检测 | 第32页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡 | 第32-33页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第32-33页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第33页 |
| ·总RNA提取 | 第33-34页 |
| ·总RNA质量、浓度和纯度检测 | 第34页 |
| ·总RNA的反转录 | 第34-35页 |
| ·引物的设计 | 第35页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·SYBR Green Real-time PCR | 第36页 |
| ·统计分析 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-42页 |
| ·胎牛成纤维细胞系 | 第37页 |
| ·5-aza-CdR对细胞增值-活力的影响 | 第37-39页 |
| ·5-aza-CdR对细胞周期的影响 | 第39-40页 |
| ·5-aza-CdR对细胞凋亡的影响 | 第40-41页 |
| ·5-aza-CdR对DNMT1基因表达水平的影响 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·5-aza-CdR对胎牛成纤维细胞增殖的影响 | 第42页 |
| ·5-aza-CdR对胎牛成纤维细胞周期的影响 | 第42-43页 |
| ·5-aza-CdR对胎牛成纤维细胞凋亡的影响 | 第43页 |
| ·5-aza-CdR对DNMT1基因表达的影响 | 第43-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 RNAi下调DNMT1表达对胎牛成纤维细胞的影响 | 第45-56页 |
| 1 材料和方法 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要分子生物学软件及数据库 | 第45页 |
| 2 供体细胞的准备和处理 | 第45-48页 |
| ·siRNA片段的设计与合成 | 第45-46页 |
| ·siRNA干扰片段转染胎牛成纤维细胞 | 第46页 |
| ·细胞增殖-毒性检测 | 第46-47页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡 | 第47页 |
| ·总RNA提取、总RNA质量、浓度和纯度检测、总RNA的反转录、引物的设计、SYBR Green Real-time PCR | 第47-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-53页 |
| ·RNAi下调DNMT1基因表达效果 | 第48-50页 |
| ·转染效果 | 第48-49页 |
| ·不同siRNA片段转染胎牛成纤维细胞后DNMT1基因的相对表达量 | 第49-50页 |
| ·RNAi调控DNMT1基因表达对胎牛成纤维细胞增值-活力影响 | 第50-51页 |
| ·RNAi下调DNMT1基因表达对胎牛成纤维细胞周期影响 | 第51-52页 |
| ·RNAi下调DNMT1基因表达对胎牛成纤维细胞凋亡影响 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·RNAi技7术 | 第53页 |
| ·RNAi下调DNMT1基因表达 | 第53-54页 |
| ·RNAi调控DNMT1基因表达对胎牛成纤维细胞增值-活力、细胞周期、细胞凋亡的影响 | 第54-55页 |
| 5 小结 | 第55-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 1 总结 | 第56页 |
| 2 需要进一步研究的相关问题 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
