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黑灵芝多糖的抗肿瘤活性及其分子机制初探

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-10页
目录第10-19页
缩略语注释第19-21页
第1章 引言第21-40页
   ·概述第21页
   ·天然抗肿瘤药物的研究现状第21-24页
     ·中药黄酮类第22页
     ·活性多糖类第22-23页
     ·生物碱类第23页
     ·其他天然药物第23-24页
   ·多糖的国内外研究进展第24-25页
   ·多糖的应用第25页
   ·神秘而新奇的多糖——灵芝多糖第25-31页
     ·灵芝概述第25-26页
     ·灵芝多糖的药理作用第26-31页
   ·灵芝多糖抗肿瘤作用机制的国内外研究现状第31-36页
     ·提高宿主免疫能力而发挥抗肿瘤作用第31-34页
     ·灵芝多糖对肿瘤细胞的生长抑制作用第34-36页
     ·灵芝多糖抗肿瘤效果的影响因素及未来研究方向第36页
   ·黑灵芝的研究概况第36-38页
   ·本实验的研究内容和意义第38-40页
     ·主要研究内容第38页
     ·主要创新之处和研究意义第38-40页
第2章 PSG-1 对 CT26 结肠癌细胞体外增殖的作用第40-48页
   ·引言第40-41页
   ·实验材料与仪器第41-42页
     ·实验细胞株第41页
     ·实验动物第41页
     ·主要试剂第41页
     ·主要溶液的配制第41-42页
     ·主要仪器第42页
   ·实验方法第42-44页
     ·细胞培养第42页
     ·PSG-1 的体外抗肿瘤活性第42-43页
     ·小鼠腹腔巨噬细胞的制备第43-44页
   ·数据处理第44页
   ·实验结果第44-46页
     ·PSG-1 对结肠癌细胞株 CT26 生长的影响第44-45页
     ·PSG-1 对腹腔巨噬细胞吞噬杀伤 CT26 细胞的影响第45-46页
   ·讨论第46-47页
   ·本章小结第47-48页
第3章 PSG-1 通过 TLR4 调节的 NF-κB、MAPK 信号转导途径抑制 CT26 荷瘤小鼠肿瘤生长的研究第48-71页
   ·引言第48-49页
   ·实验材料与仪器第49-51页
     ·实验细胞株第49页
     ·实验动物第49页
     ·主要试剂第49页
     ·主要溶液的配制第49-50页
     ·实验仪器第50-51页
   ·实验方法第51-59页
     ·CT26 细胞悬浮液的制备第51页
     ·动物模型建立及处理第51页
     ·肿瘤抑制率、脾指数及胸腺指数的测定第51-52页
     ·荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的制备第52页
     ·荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能的测定第52页
     ·NO 水平的测定第52页
     ·细胞因子分泌水平的测定第52-53页
     ·RT-PCR 检测 mRNA 表达水平第53-55页
     ·抗 Toll 样受体 4(Anti-TLR4)抗体对 PSG-1 促结肠癌移植瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α的影响第55-56页
     ·p38MAPK 特异阻断剂取消 PSG-1 促结肠癌移植瘤小鼠巨噬细胞分泌TNF-α的作用第56页
     ·NF-κB 特异阻断剂取消 PSG-1 促结肠癌移植瘤小鼠巨噬细胞分泌TNF-α的效果第56-57页
     ·蛋白印迹免疫分析(Western blot analysis)第57-59页
   ·数据处理第59页
   ·实验结果第59-68页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠的抑瘤率和免疫器官指数的影响第59-60页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用第60-61页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌 NO 的影响第61-62页
     ·PSG-1 对巨噬细胞分泌细胞因子的影响第62-63页
     ·RT-PCR 检测荷瘤小鼠巨噬细胞 TNF-α、IL-1β、iNOS mRNA 的表达43第63-64页
     ·抗 Toll 样受体 4(TLR4)抗体部分取消 PSG-1 促荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α的作用第64-65页
     ·p38MAPK 特异阻断剂取消 PSG-1 促荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的作用第65-66页
     ·NF-κB 特异性阻断剂 PDTC 取消 PSG-1 促荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的作用第66页
     ·细胞膜受体 TLR4 蛋白表达水平的测定第66-67页
     ·PSG-1 对 NF-κB 信号通路关键分子蛋白表达的影响第67页
     ·p38 MAPK 信号通路在 PSG-1 抗肿瘤作用的影响第67-68页
   ·讨论第68-70页
   ·本章小结第70-71页
第4章 PSG-1 通过 G 蛋白偶联受体信号通路抑制 CT26 荷瘤小鼠的肿瘤生长的研究第71-87页
   ·引言第71-72页
   ·实验材料与仪器第72页
     ·实验细胞株第72页
     ·实验动物第72页
     ·主要试剂第72页
     ·实验仪器第72页
   ·实验方法第72-76页
     ·结肠癌 CT26 荷瘤小鼠模型的建立第72-73页
     ·实验分组及处理第73页
     ·观察指标第73-74页
     ·肿瘤细胞的制备第74页
     ·流式细胞术检测细胞凋亡第74页
     ·cAMP 和 cGMP 浓度的测定第74页
     ·二酰基甘油(DG)和腺苷酸环化酶 (AC) 水平的测定第74页
     ·PKA 和 PKC 活性的测定第74-75页
     ·蛋白印迹法检测蛋白的表达第75页
     ·中性红吞噬实验第75页
     ·淋巴细胞增殖的测定第75页
     ·数据处理第75-76页
   ·结果与分析第76-84页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用第76-77页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠免疫器官的影响第77页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠血清中细胞因子分泌的影响第77-78页
     ·PSG-1 对 CT26 细胞凋亡的影响第78-79页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠肿瘤细胞内 cAMP 和 cGMP 水平的影响第79-80页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠肿瘤细胞内 AC 和 DG 水平的影响第80-81页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠肿瘤细胞中的 PKA、PKC 活性的调节第81-83页
     ·PSG-1 对腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响第83-84页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖的影响第84页
   ·讨论第84-86页
   ·本章小结第86-87页
第5章 PSG-1 通过线粒体凋亡途径的抗结肠癌作用第87-104页
   ·引言第87-88页
   ·实验材料与仪器第88-89页
     ·实验细胞株第88页
     ·实验动物第88页
     ·主要试剂第88页
     ·实验仪器第88-89页
   ·实验方法第89-93页
     ·建立 CT26 结肠癌荷瘤小鼠模型第89页
     ·实验分组及处理第89页
     ·观察指标第89页
     ·血清细胞因子的检测第89页
     ·CT26 结肠癌细胞的制备第89页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠 CT26 细胞增殖的作用第89页
     ·细胞凋亡的检测第89-90页
     ·CT26 细胞线粒体膜电位的测定第90页
     ·Western blot 法检测细胞凋亡相关蛋白的表达第90-91页
     ·Caspase 活性的测定第91-92页
     ·CT26 细胞内 ROS 含量的测定第92页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠淋巴细胞增殖的影响第92-93页
     ·数据处理第93页
   ·结果与分析第93-101页
     ·PSG-1 的体内抑瘤活性第93-94页
     ·PSG-1 对 CT26 小鼠免疫脏器指数的影响第94页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠肿瘤细胞的促凋亡作用第94-95页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠 CT26 细胞线粒体ΔΨm 和细胞色素 c 释放的影响第95-96页
     ·PSG-1 对 CT26 移植瘤小鼠结肠癌细胞 ROS 的影响第96-97页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠 CT26 细胞 Caspase-3 和 Caspase-9 酶活性的影响第97-98页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠 CT26 细胞中 Bcl-2 家族蛋白和 p53 蛋白表达的影响第98-99页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠血清中细胞因子水平的影响第99-100页
     ·PSG-1 对 CT26 荷瘤小鼠脾细胞增殖的影响第100-101页
   ·讨论第101-103页
   ·本章小结第103-104页
第6章 PSG-1 体外对 S180 肿瘤生长的作用第104-111页
   ·引言第104-105页
   ·实验材料与仪器第105页
     ·实验细胞株第105页
     ·实验动物第105页
     ·主要试剂第105页
     ·实验仪器第105页
   ·实验方法第105-107页
     ·S180 细胞的培养与悬浮液制备第105-106页
     ·PSG-1 对 S180 肉瘤细胞体外增殖实验第106页
     ·PSG-1 对腹腔巨噬细胞杀伤 S180 细胞效果的影响第106-107页
     ·数据处理第107页
   ·实验结果第107-109页
     ·PSG-1 对 S180 细胞的增殖作用第107-108页
     ·PSG-1 对腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响第108-109页
   ·讨论第109-110页
   ·本章小结第110-111页
第7章 PSG-1 通过 TLR4 调节的 NF-κB、MAPK 信号转导途径抑制 S180 肿瘤生长的机制探讨第111-123页
   ·引言第111-112页
   ·实验材料与仪器第112页
     ·实验细胞株第112页
     ·实验动物第112页
     ·主要试剂第112页
     ·实验仪器第112页
   ·实验方法第112-115页
     ·S180 荷瘤小鼠模型的建立第112-113页
     ·实验分组及处理第113页
     ·动物处理第113页
     ·肿瘤细胞的制备第113页
     ·PSG-1 对 S180 荷瘤小鼠肿瘤生长的影响第113-114页
     ·荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定第114页
     ·巨噬细胞中细胞因子分泌的测定第114页
     ·Griess 法测定 NO第114页
     ·荷瘤小鼠脾脏 T、B 淋巴细胞的增殖第114-115页
     ·Western blot 检测相关蛋白的表达第115页
     ·数据处理第115页
   ·实验结果第115-120页
     ·PSG-1 的体内抗肿瘤作用第115-116页
     ·实验各组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数第116-117页
     ·PSG-1 对 Con A 和 LPS 分别诱导的 T、B 淋巴细胞增殖的作用第117页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响第117-118页
     ·PSG-1 对 S180 荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞中 NO 和细胞因子分泌水平的影响第118-119页
     ·PSG-1 对 TLR4 调节的 NF-κB 信号通路的影响第119页
     ·PSG-1 对 MAPK 信号通路的影响第119-120页
   ·讨论第120-122页
   ·本章小结第122-123页
第8章 黑灵芝多糖通过 G 蛋白介导的信号转导途径抑制 S180 荷瘤小鼠的肿瘤生长的研究第123-140页
   ·引言第123-124页
   ·实验材料与仪器第124-125页
     ·实验细胞株第124页
     ·实验动物第124页
     ·主要试剂第124页
     ·实验仪器第124-125页
   ·实验方法第125-128页
     ·S180 荷瘤小鼠模型的建立第125页
     ·实验分组及饲养第125页
     ·测定抑瘤率第125页
     ·S180 荷瘤小鼠免疫器官指数的测定第125-126页
     ·肿瘤细胞的制备第126页
     ·流式细胞术检测细胞凋亡第126页
     ·二酰基甘油(DG)和腺苷酸环化酶(AC)水平的测定第126页
     ·cAMP 和 cGMP 浓度的测定第126页
     ·PKA 和 PKC 活性的测定第126页
     ·蛋白印迹法检测蛋白的表达第126-127页
     ·Ca~(2+)浓度的测定第127页
     ·中性红吞噬实验第127页
     ·淋巴细胞增殖的测定第127页
     ·数据处理第127-128页
   ·结果与分析第128-136页
     ·PSG-1 对 S180 小鼠移植瘤抑瘤率作用第128页
     ·PSG-1 对 S180 荷瘤小鼠肿瘤细胞活力的影响第128-129页
     ·PSG-1 对胸腺指数和脾指数的影响第129-130页
     ·PSG-1 对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响第130页
     ·PSG-1 对淋巴细胞增殖的作用第130-131页
     ·PSG-1 对 S180 肿瘤细胞凋亡的影响第131-132页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠 S180 细胞内 AC 和 DG 水平的影响第132-133页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠 S180 细胞内 cAMP 和 cGMP 水平的影响第133-134页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠 S180 细胞内 PKA 和 PKC 活性的影响第134-135页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠 S180 细胞内 PKA 和 PKC 蛋白表达的影响第135页
     ·PSG-1 对荷瘤小鼠 S180 细胞内 Ca~(2+)的影响第135-136页
   ·讨论第136-139页
   ·本章小结第139-140页
第9章 论文总结第140-142页
致谢第142-143页
参考文献第143-158页
攻读学位期间的研究成果第158-160页
附录第160-162页

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