| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| ·锌指蛋白 | 第14-16页 |
| ·C2H2 型锌指蛋白 | 第14页 |
| ·C3H 型锌指蛋白 | 第14-15页 |
| ·C4 型锌指蛋白 | 第15页 |
| ·C6 型锌指蛋白 | 第15页 |
| ·C3HC4 型锌指蛋白 | 第15-16页 |
| ·病毒介导的基因沉默（VIGS） | 第16-17页 |
| ·VIS 的原理 | 第16页 |
| ·VIGS 操作中的注意事项 | 第16-17页 |
| ·VIGS 的优点 | 第17页 |
| ·VIGS 的缺点以及改善措施 | 第17页 |
| ·转基因烟草 | 第17-18页 |
| ·转基因烟草研究的意义 | 第17-18页 |
| ·外源基因导入烟草的方法 | 第18页 |
| ·转化子的筛选方法 | 第18-19页 |
| ·报告基因筛选 | 第18-19页 |
| ·标记基因筛选 | 第19页 |
| ·转基因植株整合水平检测方法 | 第19页 |
| ·研究背景、内容及意义 | 第19-20页 |
| ·试验设计 | 第20-21页 |
| 第二章 NbZFP1 基因克隆及生物信息学分析 | 第21-27页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·菌株和植物材料 | 第21页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·NbZFP1 基因序列的 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第22页 |
| ·PCR 产物与亚克隆载体的连接 | 第22页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 Trans5α感受态细胞 | 第22-23页 |
| ·阳性克隆 pEASY-Blunt-NbZFP1 的 PCR 鉴定 | 第23页 |
| ·阳性克隆质粒 DNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·NbZFP1 基因生物信息学分析 | 第24页 |
| ·结果分析 | 第24-26页 |
| ·NbZFP1 基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·NbZFP1 基因生物信息学分析 | 第25-26页 |
| ·本章小结与讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 NbZFP1 蛋白的体外重组表达及纯化 | 第27-34页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·菌株材料 | 第27页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第27页 |
| ·培养基及试剂配方 | 第27-28页 |
| ·NbZFP1 的表达载体构建 | 第28-29页 |
| ·NbZFP1 重组蛋白的表达、纯化和检测 | 第29-30页 |
| ·NbZFP1 重组蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·NbZFP1 重组蛋白的纯化和检测 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-33页 |
| ·NbZFP1 原核表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·NbZFP1 重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·NbZFP1 重组蛋白的纯化 | 第32页 |
| ·NbZFP1 重组蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第32-33页 |
| ·讨论与小结 | 第33-34页 |
| 第四章 NbZFP1 蛋白的亚细胞定位 | 第34-38页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌株材料 | 第34页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第34页 |
| ·培养基及试剂配方 | 第34页 |
| ·农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·瞬时表达载体 pGDG-NbZFP1 的构建 | 第35页 |
| ·NbZFP1 在烟草植株细胞中的瞬时表达 | 第35-36页 |
| ·pGDG-NbZFP1 电击转化农杆菌 GV3101 | 第35页 |
| ·农杆菌渗入法转化烟草 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-37页 |
| ·NbZFP1 成功构建于瞬时表达载体 | 第36页 |
| ·NbZFP1 蛋白的亚细胞定位 | 第36-37页 |
| ·讨论与小结 | 第37-38页 |
| 第五章 利用 VIGS 方法研究 NbZFP1 基因的功能 | 第38-45页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·菌株材料 | 第38页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第38页 |
| ·培养基及试剂配方 | 第38页 |
| ·TRV2-NbZFP1 系列载体的构建 | 第38-40页 |
| ·VIGS 沉默本生烟 NbZFP1 基因 | 第40页 |
| ·VIGS 沉默效率的检测 | 第40-42页 |
| ·VIGS 植株 RNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·RNA 反转录成 cDNA | 第41页 |
| ·Real-Time PCR 检测 VIGS 沉默效率 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-43页 |
| ·VIGS 沉默载体 TRV2-A1、TRV2-A2 的构建 | 第42页 |
| ·VIGS 沉默效率的检测 | 第42-43页 |
| ·VIGS-NbZFP1 沉默植株的表型分析 | 第43页 |
| ·讨论与小结 | 第43-45页 |
| 第六章 转 NbZFP1 基因烟草的获得及分子检测 | 第45-56页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌株材料 | 第45页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第45页 |
| ·主要溶液的配制 | 第45-46页 |
| ·过表达载体 pBI121-NbZFP1 的构建 | 第46页 |
| ·转 pBI121-NbZFP1 基因本生烟的获得 | 第46-47页 |
| ·转基因烟草植株的分子检测 | 第47-50页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR 检测 | 第47-48页 |
| ·转基因烟草 Southern blot 检测 | 第48-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-55页 |
| ·植物过表达载体 pBI121-NbZFP1 构建 | 第50-51页 |
| ·转基因本生烟的再生 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草的 PCR 检测 | 第52-53页 |
| ·阳性转基因烟草 Southern Blot 检测 | 第53页 |
| ·转 NbZFP1 基因烟草植株表型分析 | 第53-55页 |
| ·讨论与小结 | 第55-56页 |
| 第七章 全文结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
