| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-24页 |
| 前言 | 第10页 |
| ·血管瘤的研究进展 | 第10-13页 |
| ·血管瘤的分类 | 第10-11页 |
| ·血管瘤发病机制及危害 | 第11-12页 |
| ·目前主要的血管瘤治疗方法及优缺点 | 第12-13页 |
| ·以鸡冠为模型的血管瘤动物研究 | 第13页 |
| ·血管生成抑制素的研究 | 第13-18页 |
| ·管生成抑制因子 | 第13-17页 |
| ·钙网蛋白 | 第17-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-21页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的特点 | 第18-19页 |
| ·发酵产物的影响因素 | 第19-20页 |
| ·表达系统的缺陷及解决办法 | 第20-21页 |
| ·本研究的意义、内容以及技术路线 | 第21-24页 |
| ·本研究的意义 | 第21-22页 |
| ·本研究的内容 | 第22页 |
| ·技术路线 | 第22-24页 |
| 第2章 CL基因的合成与表达载体的构建 | 第24-40页 |
| ·材料与方法 | 第24-36页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·质粒及菌株 | 第24页 |
| ·分子生物学常用酶和试剂(盒) | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·主要试剂、培养基和缓冲液 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·CL基因的合成 | 第27-29页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·CL基因和载体的双酶切 | 第30页 |
| ·酶切产物的回收 | 第30页 |
| ·目的基因与载体的连接与转化 | 第30-31页 |
| ·重组子的鉴定 | 第31-32页 |
| ·酵母重组表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·酵母重组表达载体的鉴定 | 第33-36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·CL基因的合成 | 第36页 |
| ·PPIC9K-CL重组表达载体的构建 | 第36页 |
| ·PPIC9K-CL重组表达载体双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·PPIC9K-CL重组表达载体的测序分析 | 第37-38页 |
| ·酵母重组表达载体的构建 | 第38页 |
| ·酵母重组表达载体高拷贝转化子的筛选 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 CL蛋白的表达、纯化及活性分析 | 第40-57页 |
| ·材料与方法 | 第40-48页 |
| ·材料 | 第40-43页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| ·主要试剂、培养基 | 第41页 |
| ·蛋白电泳主要试剂 | 第41-42页 |
| ·蛋白纯化主要试剂 | 第42页 |
| ·蛋白活性分析主要试剂 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-48页 |
| ·重组酵母工程菌的摇瓶表达 | 第43页 |
| ·表达产物的初步纯化及SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| ·初步纯化产物的SDS-PAGE电泳 | 第43-44页 |
| ·重组酵母工程菌的高密度发酵表达 | 第44页 |
| ·重组目的蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·纯化后的目的蛋白的透析处理 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制活性的测定 | 第46页 |
| ·重组蛋白对细胞用药实验 | 第46页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第46页 |
| ·重组蛋白对鸡冠血管生成抑制活性的测定 | 第46-48页 |
| ·实验结果 | 第48-56页 |
| ·重组酵母工程菌的摇瓶表达 | 第48页 |
| ·表达蛋白纯化及透析处理 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制活性的测定 | 第49页 |
| ·重组酵母工程菌的高密度发酵 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白对细胞用药实验 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白对鸡冠血管生成抑制活性的测定 | 第51-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第4章 讨论及结论 | 第57-61页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·Calreticulin-Like蛋白的开发前景 | 第57-58页 |
| ·表达体系的选择 | 第58-59页 |
| ·本研究中值得改进的部分和研究的下一步研究方向 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |