b型流感嗜血杆菌多糖制备工艺及其D蛋白原核可溶性表达研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-11页 |
| 1. Hib概况 | 第8-9页 |
| ·Hib病原学及流行病学 | 第8页 |
| ·Hib多糖免疫机理 | 第8-9页 |
| 2. Hib结合疫苗 | 第9-11页 |
| ·结合方法 | 第9页 |
| ·结合用载体蛋白 | 第9-10页 |
| ·中国Hib疫苗应用现状 | 第10-11页 |
| 3 本实验的目的及意义 | 第11页 |
| 第一部分 b型流感嗜血杆菌的多糖的制备 | 第11-33页 |
| 1. 材料 | 第11-13页 |
| ·菌株来源 | 第11页 |
| ·主要试剂 | 第11-12页 |
| ·主要仪器设备 | 第12-13页 |
| ·主要试剂配方 | 第13页 |
| 2. 方法 | 第13-23页 |
| ·种子批制备及检定 | 第13-15页 |
| ·Hib菌种的发酵培养 | 第15页 |
| ·多糖制备工艺 | 第15-17页 |
| ·连续三批100L发酵中试生产多糖的质量鉴定 | 第17-23页 |
| 3. 结果 | 第23-32页 |
| ·种子批检定结果 | 第23-24页 |
| ·菌种扩大培养过程中各项鉴定 | 第24-26页 |
| ·多糖制备工艺的优化 | 第26-28页 |
| ·连续三批100L发酵中试生产多糖的质量鉴定 | 第28-32页 |
| 4. 讨论 | 第32页 |
| 5. 小结 | 第32-33页 |
| 第二部分 b型流感嗜血杆菌D蛋白原核可溶性表达 | 第33-48页 |
| 1. 实验材料 | 第33页 |
| ·菌株及质粒 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·主要器材与仪器 | 第33页 |
| ·主要试剂配方 | 第33页 |
| 2. 方法 | 第33-40页 |
| ·HibCMCC58534株基因组的制备 | 第33-34页 |
| ·b型流感嗜血杆菌D蛋白(hpd)基因的扩增 | 第34-35页 |
| ·重组表达载体的构建及克隆 | 第35-38页 |
| ·D蛋白的原核表达 | 第38-39页 |
| ·重组D蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·重组D蛋白Western blot分析 | 第39-40页 |
| 3. 结果 | 第40-45页 |
| ·b型流感嗜血杆菌D蛋白(hpd)基因的扩增 | 第40页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第40-43页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·D蛋白纯化过程中SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| ·重组D蛋白的Western blot分析 | 第45页 |
| 4. 讨论 | 第45-47页 |
| ·目的蛋白的分析与表达 | 第45页 |
| ·表达系统与表达载体的选择 | 第45-46页 |
| ·重组D蛋白的表达 | 第46页 |
| ·重组D蛋白的纯化 | 第46页 |
| ·本研究的意义 | 第46-47页 |
| 5. 小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录1 缩略语 | 第52-53页 |
| 附录2 溶液配制 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 个人简历 | 第61-62页 |
