| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 材料与方法 | 第10-31页 |
| 1 材料 | 第10-18页 |
| ·细胞和病毒 | 第10页 |
| ·质粒 | 第10-12页 |
| ·生化试剂 | 第12-13页 |
| ·主要试剂盒 | 第13-14页 |
| ·抗体 | 第14页 |
| ·工具酶 | 第14页 |
| ·溶液 | 第14-16页 |
| ·引物序列 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·数据处理和分析软件 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-29页 |
| ·细胞培养 | 第18页 |
| ·假病毒的包装与感染 | 第18-19页 |
| ·贴壁细胞全蛋白的抽提 | 第19页 |
| ·蛋白定量分析 | 第19-20页 |
| ·Western Blot检测蛋白质的表达 | 第20-22页 |
| ·免疫荧光 | 第22页 |
| ·基因组的提取 | 第22-23页 |
| ·质粒转化 | 第23页 |
| ·质粒的中量提取和纯化 | 第23-24页 |
| ·配制琼脂糖凝胶 | 第24页 |
| ·反转录PCR | 第24-25页 |
| ·inverse PCR | 第25-27页 |
| ·DNA电泳凝胶回收 | 第27-28页 |
| ·过表达带血凝素标签的Nup214蛋白的载体构建 | 第28-29页 |
| ·质粒转染 | 第29页 |
| 3 技术方案 | 第29-31页 |
| 研究结果 | 第31-43页 |
| 1 以EV71感染致死为选择压力,利用VBIM系统筛选获得抵抗EV71感染的突变细胞克隆 | 第31-33页 |
| ·VBIM系统慢病毒的包装 | 第31页 |
| ·VBIM慢病毒转导RD细胞 | 第31-32页 |
| ·以EV71病毒为筛选压力,筛选获得抗EV71感染的突变细跑株 | 第32-33页 |
| 2 利用CRE重组酶切除筛选细胞克隆中VBIM,验证因VBIM插入所致突变克隆的可逆性 | 第33-37页 |
| ·构建pMSCV-Cre-Puro病毒表达载体 | 第33页 |
| ·包装MSCV-Cre-puro逆转录病毒,在感染细胞中表达Cre重组酶 | 第33-34页 |
| ·通过观测表型回复确定突变细胞株表型是因VBIM的插入所致 | 第34-37页 |
| 3 与EV71感染相关的宿主基因的发现 | 第37-38页 |
| 4 对SD2-2突变细胞株基因组扩增产物——NUP214的分析 | 第38-41页 |
| ·SD2-2中VBIM插入方向的鉴定 | 第40页 |
| ·SD2-2中Nup214表达水平的检测 | 第40-41页 |
| 5 在HEK293T中过表达NUP214可以促进EV71的复制 | 第41-43页 |
| ·构建带HA标签的表达载体 | 第41-42页 |
| ·过表达Nup214可以增强EV71病毒在HEK293T细孢中的复制 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 结论 | 第46-50页 |
| 综述 | 第50-65页 |
| 综述参考文献 | 第60-65页 |
| 英文缩略语对照表 | 第65-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |
| 发表文章 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
