| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·生物表面活性剂 | 第13-14页 |
| ·生物表面活性剂概述 | 第13页 |
| ·生物表面活性剂提高石油采收率 | 第13-14页 |
| ·鼠李糖脂 | 第14-22页 |
| ·鼠李糖脂概述 | 第15-16页 |
| ·鼠李糖脂的合成 | 第16-19页 |
| ·鼠李糖脂的工业应用 | 第19-22页 |
| ·鼠李糖脂用于生物修复 | 第19-21页 |
| ·鼠李糖脂用于提高石油采收率 | 第21-22页 |
| ·鼠李糖脂产生菌的诱变育种 | 第22-23页 |
| ·化学诱变 | 第22页 |
| ·物理诱变 | 第22-23页 |
| ·紫外诱变 | 第22-23页 |
| ·等离子体诱变 | 第23页 |
| ·复合诱变 | 第23页 |
| ·鼠李糖脂的生产与展望 | 第23-24页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第24-27页 |
| 第二章 铜绿假单胞菌的诱变、筛选及突变株产鼠李糖脂的条件优化 | 第27-43页 |
| 引言 | 第27页 |
| ·材料和方法 | 第27-31页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·培养方法 | 第28页 |
| ·鼠李糖标准曲线的绘制 | 第28页 |
| ·鼠李糖脂产量的测定 | 第28-29页 |
| ·铜绿假单胞菌硫酸二乙酯(DES)诱变 | 第29页 |
| ·铜绿假单胞菌紫外(UV)诱变 | 第29页 |
| ·铜绿假单胞菌等离子体诱变 | 第29-30页 |
| ·复合诱变 | 第30页 |
| ·初筛平板 | 第30页 |
| ·摇瓶复筛 | 第30-31页 |
| ·鼠李糖脂粗品提取 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-41页 |
| ·菌株的复壮 | 第31-32页 |
| ·鼠李糖标准曲线 | 第32-33页 |
| ·初筛血平板 | 第33页 |
| ·铜绿假单胞菌硫酸二乙酯(DES)诱变 | 第33-34页 |
| ·铜绿假单胞菌紫外(UV)诱变 | 第34-35页 |
| ·铜绿假单胞菌等离子体诱变 | 第35-36页 |
| ·诱变结果 | 第36-37页 |
| ·高产突变株PZA1发酵培养基的优化 | 第37-40页 |
| ·碳源优化 | 第37-38页 |
| ·正交优化实验及结果分析 | 第38-40页 |
| ·突变株PZAl的遗传稳定性 | 第40页 |
| ·鼠李糖脂粗品 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 第三章 多拷贝启动子构建铜绿假单胞菌鼠李糖脂高产菌株 | 第43-61页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| ·材料和方法 | 第44-50页 |
| ·菌株、质粒 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·主要仪器与试剂、工具酶 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·目的基因扩增 | 第45-46页 |
| ·双拷贝启动子——融合PCR融合启动子 | 第46-47页 |
| ·构建重组质粒 | 第47-49页 |
| ·铜绿假单胞菌转化及转化子验证 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-59页 |
| ·铜绿假单胞菌基因组提取 | 第50-51页 |
| ·扩增铜绿假单胞菌鼠李糖基转移酶rhlABRI操纵子 | 第51-52页 |
| ·扩增启动子,融合PCR合成双拷贝启动子 | 第52页 |
| ·重组质粒 | 第52-56页 |
| ·构建重组质粒 | 第52-54页 |
| ·重组质粒验证 | 第54-56页 |
| ·多拷贝启动子重组质粒的铜绿单胞菌转化子 | 第56-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第四章 敲除铜绿假单胞菌PHA合成基因提高鼠李糖脂产量 | 第61-81页 |
| 引言 | 第61-62页 |
| ·材料和方法 | 第62-70页 |
| ·菌株、质粒 | 第62-63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·主要仪器与试剂、工具酶 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-70页 |
| ·气相色谱(GC)测定PHA | 第64页 |
| ·目的基因扩增 | 第64-65页 |
| ·构建敲除盒 | 第65-68页 |
| ·三亲杂交敲除铜绿假单胞菌PHA合成基因 | 第68-69页 |
| ·铜绿假单胞菌转化子验证 | 第69-70页 |
| ·鼠李糖脂产量的测定 | 第70页 |
| ·结果与分析 | 第70-80页 |
| ·检测铜绿假单胞菌SH6的PHA含量 | 第70-72页 |
| ·构建敲除盒及三亲杂交转化铜绿假单胞菌 | 第72-78页 |
| ·敲除株的PHA含量与鼠李糖脂产量的测定 | 第78-79页 |
| ·敲除株的遗传稳定性 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第五章 鼠李糖基转移酶在嗜热菌中的异源表达 | 第81-97页 |
| 引言 | 第81页 |
| ·材料和方法 | 第81-88页 |
| ·菌株、质粒 | 第81-82页 |
| ·培养基 | 第82-83页 |
| ·主要仪器与试剂、工具酶 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-88页 |
| ·16S法和ITS法鉴定嗜热菌株 | 第84-85页 |
| ·构建重组质粒 | 第85-86页 |
| ·电转化 | 第86-87页 |
| ·感受态细胞化学转化 | 第87页 |
| ·原生质体转化 | 第87-88页 |
| ·嗜热菌转化子验证 | 第88页 |
| ·结果与分析 | 第88-96页 |
| ·嗜热菌AP-1、DB-2的形态观察 | 第88-91页 |
| ·嗜热菌AP-1菌种分子鉴定结果 | 第89-91页 |
| ·嗜热菌DB-2菌种分子鉴定结果 | 第91页 |
| ·构建异源表达重组质粒 | 第91-93页 |
| ·AP-1和DB-2电转 | 第93-94页 |
| ·AP-1和DB-2化学转化 | 第94页 |
| ·AP-1和DB-2原生质体转化 | 第94-96页 |
| ·小结与展望 | 第96-97页 |
| 全文总结与展望 | 第97-99页 |
| 总结 | 第97-98页 |
| 展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-112页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第115页 |
