| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-39页 |
| 1. 梨果实石细胞的形态特征 | 第20页 |
| 2. 石细胞的研究方法 | 第20-22页 |
| ·石细胞分离称量的方法 | 第20-21页 |
| ·酶解法 | 第20-21页 |
| ·冷冻分离法 | 第21页 |
| ·硫酸处理法 | 第21页 |
| ·盐酸处理法 | 第21页 |
| ·石细胞的解剖观察方法 | 第21-22页 |
| ·番红-固绿对染 | 第22页 |
| ·间苯三酚-盐酸(Wiesner试剂)染色 | 第22页 |
| ·Maule试剂染色 | 第22页 |
| ·甲苯胺蓝染色 | 第22页 |
| 3. 梨果实石细胞与果实品质的关系 | 第22-23页 |
| 4. 石细胞在梨果实中的分布特点和形成过程 | 第23-26页 |
| ·石细胞在梨果实中的分布特点 | 第23-25页 |
| ·石细胞的形成过程 | 第25-26页 |
| 5. 石细胞发育的环境调控 | 第26-27页 |
| ·石细胞发育与周围细胞的关系 | 第26页 |
| ·石细胞发育与栽培环境的关系 | 第26-27页 |
| 6. 石细胞的形成与木质素代谢 | 第27-28页 |
| 7. 木质素的分类和分布 | 第28-29页 |
| 8. 木质素结构的鉴定 | 第29-33页 |
| ·木质素的制备 | 第29-31页 |
| ·磨木木质素(MWL) | 第30页 |
| ·Brauns木质素 | 第30页 |
| ·高碘酸木质素 | 第30页 |
| ·硫酸木质素和盐酸木质素 | 第30-31页 |
| ·木质素分子量的分析方法 | 第31页 |
| ·木质素分析的降解方法 | 第31-32页 |
| ·高锰酸钾降解 | 第31页 |
| ·硝基苯和氧化铜氧化 | 第31-32页 |
| ·木质素的非降解分析方法 | 第32-33页 |
| ·质子核磁共振谱(~1H-NMR) | 第32页 |
| ·碳-13核磁共振谱(~(13)C-NMR) | 第32页 |
| ·紫外-可见光谱(Ultraviolet/visible) | 第32-33页 |
| ·红外光谱(Infrar) | 第33页 |
| 9. 木质素的生物合成 | 第33-39页 |
| ·苯丙烷(Phenypropanoid)途径 | 第34-36页 |
| ·木质素合成中特异的途径 | 第36-37页 |
| ·木质素单体运输及氧化聚合为木质素 | 第37-39页 |
| 第二章 化学及显微方法研究梨果实石细胞 | 第39-55页 |
| 摘要 | 第39-40页 |
| 1. 材料与方法 | 第40-43页 |
| ·植物材料准备及石细胞含量的测定 | 第40页 |
| ·梨果实石细胞中木质素、纤维素含量的测定 | 第40-41页 |
| ·果肉石蜡切片的准备 | 第41页 |
| ·光学(LM)、荧光(FM)及激光共聚焦显微镜(CLSM)观察 | 第41-42页 |
| ·电子显微镜样品的准备 | 第42页 |
| ·石细胞表层及内部常见元素分析 | 第42-43页 |
| ·显微图片分析 | 第43页 |
| 2. 结果与分析 | 第43-52页 |
| ·石细胞在梨果肉中形态学分布特性 | 第43-45页 |
| ·石细胞表层及内部元素分析 | 第45-47页 |
| ·石细胞木质素及纤维素的分析 | 第47-48页 |
| ·石细胞荧光分析 | 第48-49页 |
| ·石细胞超微结构的扫描电镜观察 | 第49-50页 |
| ·石细胞细胞壁的显微观察及软件分析 | 第50-52页 |
| 3. 讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 光谱方法分析梨果实石细胞木质素结构类型 | 第55-71页 |
| 摘要 | 第55-56页 |
| 1. 材料和方法 | 第56-58页 |
| ·植物材料及石细胞的准备 | 第56页 |
| ·徒手切片的Maule试剂染色 | 第56页 |
| ·梨果实石细胞木质素的提取与纯化 | 第56-57页 |
| ·木质素的碱性硝基苯氧化降解反应 | 第57页 |
| ·梨果实石细胞木质素元素、分子量及热重分析 | 第57-58页 |
| ·木质素紫外光谱(UV)分析 | 第58页 |
| ·木质素红外光谱(FTIR)分析 | 第58页 |
| ·木质素降解产物的高效液相色谱(HPLC)分析 | 第58页 |
| ·木质素核磁共振(NMR)谱分析 | 第58页 |
| 2. 结果与分析 | 第58-68页 |
| ·Maule染色效果 | 第58-59页 |
| ·木质素元素、分子量与玻璃化温度分析 | 第59-62页 |
| ·紫外光谱(UV)分析 | 第62页 |
| ·红外光谱(FTIR)分析 | 第62-65页 |
| ·木质素硝基苯氧化及高效液相色谱(HPLC)分析 | 第65-66页 |
| ·~1H-NMR光谱分析 | 第66-67页 |
| ·~(13)C-DEPT~(135)光谱分析 | 第67-68页 |
| 3. 讨论 | 第68-71页 |
| 第四章 套袋和叶面喷钙及多效唑对梨果实石细胞形成的影响 | 第71-97页 |
| 第一节 不同时期套袋对梨果实石细胞发育及相关酶的影响 | 第72-84页 |
| 摘要 | 第72页 |
| 1. 材料与方法 | 第72-74页 |
| ·材料准备 | 第72页 |
| ·石蜡切片的准备与观察 | 第72-73页 |
| ·石细胞含量的测定 | 第73页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)的提取与活性测定 | 第73页 |
| ·过氧化物酶(POD)的提取与活性测定 | 第73-74页 |
| ·多酚氧化酶(PPO)的提取与活性测定 | 第74页 |
| 2. 结果与分析 | 第74-82页 |
| ·不同时期套袋对‘砀山酥梨’果实发育过程中石细胞发育的影响 | 第74-78页 |
| ·‘砀山酥梨’果实发育过程中石细胞含量的变化 | 第74-75页 |
| ·‘砀山酥梨’果实发育过程中石细胞团分布密度的变化 | 第75-76页 |
| ·‘砀山酥梨’果实发育过程中石细胞团纵横径的变化 | 第76-78页 |
| ·不同时期套袋对‘砀山酥梨’果实发育过程中几种酶活性的影响 | 第78-81页 |
| ·‘砀山酥梨’果实发育过程中PAL活性的变化 | 第78-79页 |
| ·‘砀山酥梨’果实发育过程中POD活性的变化 | 第79-80页 |
| ·‘砀山酥梨’果实发育过程中PPO活性的变化 | 第80-81页 |
| ·‘砀山酥梨’果实中石细胞与几种酶的关系 | 第81-82页 |
| 3. 讨论 | 第82-84页 |
| 第二节 喷施氯化钙和多效唑对梨果实石细胞及相关酶的影响 | 第84-97页 |
| 摘要 | 第84页 |
| 1. 材料和方法 | 第84-86页 |
| ·材料准备 | 第84-85页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)的提取与活性测定 | 第85页 |
| ·细胞质及细胞壁结合POD(POD Ⅰ和POD Ⅱ)的提取与活性测定 | 第85页 |
| ·多酚氧化酶(PPO)的提取与活性测定 | 第85页 |
| ·石细胞含量的测定 | 第85页 |
| ·木质素含量的测定 | 第85-86页 |
| ·总酚含量的测定 | 第86页 |
| 2. 结果与分析 | 第86-94页 |
| ·CaCl_2及多效唑对梨果实中木质素代谢酶类活性的影响 | 第86-91页 |
| ·果实发育过程中PAL活性的变化 | 第86-88页 |
| ·果实发育过程中细胞质POD(POD Ⅰ)活性的变化 | 第88-89页 |
| ·果实发育过程中细胞壁结合POD(POD Ⅱ)活性的变化 | 第89-90页 |
| ·果实发育过程中PPO活性的变化 | 第90-91页 |
| ·果实中可溶性酚、木质素及石细胞的含量 | 第91-93页 |
| ·酶代谢与梨果实中酚类及石细胞代谢的关系 | 第93-94页 |
| 3. 讨论 | 第94-97页 |
| 第五章 过氧化物酶、过氧化氢与梨果实石细胞形成的关系 | 第97-111页 |
| 摘要 | 第97-98页 |
| 1. 材料与方法 | 第98-101页 |
| ·材料准备 | 第98页 |
| ·石细胞、木质素含量测定 | 第98页 |
| ·石细胞的组织定位 | 第98页 |
| ·过氧化物酶的组织定位 | 第98-99页 |
| ·过氧化物酶(POD)的提取 | 第99页 |
| ·细胞质过氧化物酶(POD Ⅰ)及细胞壁结合过氧化物酶(POD Ⅱ)的提取 | 第99页 |
| ·碱性和酸性细胞壁过氧化物酶的分离 | 第99页 |
| ·过氧化物酶活力的测定 | 第99-100页 |
| ·以联苯胺(DAB)为反应底物 | 第99页 |
| ·以杂环吖嗪(ABTS)为反应底物 | 第99页 |
| ·以愈创木酚(Guaiacol)为反应底物 | 第99-100页 |
| ·以丁香醛连氮(SYR)为反应底物 | 第100页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第100页 |
| ·等电聚焦(IEF)电泳 | 第100页 |
| ·电镜过氧化物酶定位 | 第100-101页 |
| ·样品固定 | 第100页 |
| ·漂洗样品 | 第100页 |
| ·切片 | 第100-101页 |
| ·切片孵育 | 第101页 |
| ·切片漂洗与后固定 | 第101页 |
| ·过氧化氢含量测定 | 第101页 |
| ·电镜过氧化氢定位 | 第101页 |
| 2. 结果与分析 | 第101-109页 |
| ·‘砀山酥梨’果实石细胞及木质素含量 | 第101-103页 |
| ·‘砀山酥梨’果实中石细胞、过氧化物酶的组织分布 | 第103页 |
| ·‘砀山酥梨’果实中的过氧化物酶 | 第103-108页 |
| ·愈创木酚过氧化物酶的变化 | 第103-105页 |
| ·丁香醛连氮过氧化物酶的变化 | 第105-106页 |
| ·等电聚焦(IEF)电泳 | 第106页 |
| ·酸性和碱性细胞壁结合过氧化物酶(POD Ⅱ)分析 | 第106-108页 |
| ·果实发育过程中过氧化氢(H_2O_2)的变化 | 第108页 |
| ·过氧化物酶和过氧化氢的电镜定位 | 第108-109页 |
| 3. 讨论 | 第109-111页 |
| 第六章 梨果实PAL、POD、CAD基因的克隆及分析 | 第111-137页 |
| 第一节 梨果实中PAL基因的克隆及序列分析 | 第112-122页 |
| 摘要 | 第112页 |
| 1. 材料和方法 | 第112-115页 |
| ·植物材料 | 第112页 |
| ·总RNA的提取及纯化 | 第112-113页 |
| ·梨果实中苯丙氨酸解氨酶基因的RT-PCR扩增 | 第113-114页 |
| ·扩增片段的回收与连接 | 第114页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第114页 |
| ·培养基的准备 | 第114页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第114-115页 |
| ·序列分析 | 第115页 |
| 2. 结果与分析 | 第115-120页 |
| ·梨果实的RNA | 第115页 |
| ·梨果实中PAL基因cDNA的克隆 | 第115-116页 |
| ·核酸、蛋白质序列分析 | 第116-118页 |
| ·分子进化分析 | 第118-119页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶疏水性及三级结构预测 | 第119-120页 |
| 3. 讨论 | 第120-122页 |
| 第二节 梨果实CAD基因的克隆及序列分析 | 第122-129页 |
| 摘要 | 第122页 |
| 1. 材料和方法 | 第122-123页 |
| ·植物材料 | 第122页 |
| ·总RNA的提取及纯化 | 第122页 |
| ·梨果实中肉桂醇脱氢酶基因的RT-PCR扩增 | 第122-123页 |
| ·扩增片段的回收与连接 | 第123页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第123页 |
| ·培养基的准备 | 第123页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第123页 |
| ·序列分析 | 第123页 |
| 2. 结果与分析 | 第123-128页 |
| ·梨果实中CAD基因cDNA的克隆 | 第123-124页 |
| ·核酸、蛋白质序列分析 | 第124-126页 |
| ·分子进化分析 | 第126-127页 |
| ·肉桂醇脱氢酶疏水性及三级结构预测 | 第127-128页 |
| 3. 讨论 | 第128-129页 |
| 第三节 梨果实POD基因的克隆及序列分析 | 第129-137页 |
| 摘要 | 第129页 |
| 1. 材料和方法 | 第129-130页 |
| ·植物材料 | 第129页 |
| ·总RNA的提取及纯化 | 第129页 |
| ·梨果实中过氧化物酶基因的RT-PCR扩增 | 第129-130页 |
| ·扩增片段的回收与连接 | 第130页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第130页 |
| ·培养基的准备 | 第130页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化及阳性克隆的筛选 | 第130页 |
| ·序列分析 | 第130页 |
| 2. 结果与分析 | 第130-135页 |
| ·梨果实中POD基因cDNA的克隆 | 第130-131页 |
| ·核酸、蛋白质序列分析 | 第131-133页 |
| ·分子进化分析 | 第133-134页 |
| ·过氧化物酶疏水性及三级结构预测 | 第134-135页 |
| 3. 讨论 | 第135-137页 |
| 全文讨论 | 第137-145页 |
| 1. 梨果实石细胞形成与木质素沉积 | 第138-139页 |
| 2. 梨果实石细胞木质素的结构类型 | 第139-140页 |
| 3. 栽培措施对梨果实石细胞形成的调控 | 第140-141页 |
| 4. 梨果实内PAL、PPO、POD及H_2O_2与石细胞形成的关系 | 第141-142页 |
| 5. 梨果实中PAL、CAD和POD基因 | 第142-145页 |
| 全文结论与创新点 | 第145-147页 |
| 参考文献 | 第147-163页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165页 |
