| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 縮略词 | 第12-13页 |
| 上篇 文献综述 | 第13-41页 |
| 第一章 苯并咪唑类杀菌剂研究进展 | 第13-24页 |
| 1 苯并咪唑类杀菌剂 | 第13页 |
| 2 苯并咪唑类杀菌剂的作用机制 | 第13-14页 |
| 3 苯并咪唑类化合物的生物活性 | 第14-15页 |
| 4 苯并咪唑类杀菌剂抗药性 | 第15-18页 |
| ·抗药性菌株的性质 | 第15-16页 |
| ·苯并咪唑杀菌剂抗药性机制 | 第16-18页 |
| ·β-微管蛋白在物种间的差异与苯并咪唑抗药性 | 第18页 |
| 5 苯并咪唑类杀菌剂抗药性治理策略 | 第18-19页 |
| 参考文献 | 第19-24页 |
| 第二章 禾谷镰孢菌对多菌灵的抗药性研究进展 | 第24-29页 |
| 1 抗性测定方法及敏感基线 | 第25页 |
| 2 抗药性发生现状 | 第25页 |
| 3 抗药性菌株的性质 | 第25-26页 |
| 4 小麦赤霉病菌对多菌灵的抗药性遗传学研究 | 第26页 |
| 5 抗性分子机制研究 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-29页 |
| 第三章 丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第29-41页 |
| 1 筛选标记 | 第30-31页 |
| ·营养选择性标记 | 第30页 |
| ·显性选择性标记 | 第30-31页 |
| 2 丝状真菌遗传因子的转化方法 | 第31-36页 |
| ·PEG介导的遗传转化 | 第31-32页 |
| ·电击转化法 | 第32页 |
| ·限制性内切酶介导转化法 | 第32页 |
| ·醋酸锂转化法 | 第32-33页 |
| ·基因枪转化方法 | 第33页 |
| ·共转化 | 第33页 |
| ·根癌农杆菌介导的转化 | 第33-36页 |
| 3 基因标签的获得方法 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| 下篇 研究内容 | 第41-117页 |
| 第一章 禾谷镰孢菌β_2-微管蛋白基因的克隆及β_1-、β_2-微管蛋白在生活史各阶段的表达水平 | 第41-63页 |
| 摘要 | 第41-42页 |
| 1 材料与方法 | 第42-48页 |
| ·供试菌株 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42-43页 |
| ·总RNA的提取 | 第43页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第43-44页 |
| ·PCR产物克隆及测序 | 第44页 |
| ·禾谷镰孢菌β_2-微管蛋白基因cDNA克隆 | 第44-47页 |
| ·分生孢子和芽管产生方法 | 第47页 |
| ·子囊孢子产生方法 | 第47页 |
| ·半定量RT-PCR分析β_1-、β_2-微管蛋白在生活周期各阶段的表达水平 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-57页 |
| ·禾谷镰孢菌β_2-微管蛋白基因克隆 | 第48-49页 |
| ·禾谷镰孢菌β_2-微管蛋白基因序列的分析 | 第49-56页 |
| ·禾谷镰孢菌β_1-、β_2-微管蛋白基因在生活史各阶段的表达规律 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| ABSTRACT | 第62-63页 |
| 第二章 基因功能互补验证禾谷镰孢菌对多菌灵抗药性基因—β_2-微管蛋白基因 | 第63-88页 |
| 摘要 | 第63-64页 |
| 1 材料与方法 | 第64-75页 |
| ·供试菌株 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·质粒 | 第64-65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·基因组DNA提取 | 第65页 |
| ·Southern杂交 | 第65-67页 |
| ·禾谷镰孢菌β_2-tub敲除\回复载体的构建 | 第67-70页 |
| ·禾谷镰孢菌PEG介导的原生质体转化 | 第70-71页 |
| ·禾谷镰孢菌转化子筛选和验证 | 第71-73页 |
| ·RT-PCR检测β_2-tub敲除\回复突变体中β_1-tub和β_2-tub的表达 | 第73-74页 |
| ·禾谷镰孢菌及其β_2-tub敲除\回复突变体对多菌灵敏感性的测定 | 第74页 |
| ·对禾谷镰孢菌及其β_2-tub敲除\回复突变体生物学性质的研究 | 第74-75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-83页 |
| ·禾谷镰孢菌β_2-tub敲除及回复载体的构建 | 第75-77页 |
| ·敲除禾谷镰孢菌β_2-tub | 第77-80页 |
| ·禾谷镰孢菌β_2-tub的回复突变 | 第80-81页 |
| ·禾谷镰孢菌及其β_2-tub敲除\回复突变体对多菌灵的敏感性 | 第81页 |
| ·禾谷镰孢菌及其β_2-tub敲除\回复突变体的生物学性质 | 第81-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| ABSTRACT | 第87-88页 |
| 第三章 禾谷镰孢菌β_2-微管蛋白17、73、167、198和240位氨基酸突变与多菌灵抗药性关系的研究 | 第88-103页 |
| 摘要 | 第88-89页 |
| 1 材料与方法 | 第89-94页 |
| ·供试菌株 | 第89页 |
| ·试剂 | 第89页 |
| ·质粒 | 第89-90页 |
| ·正负筛选标记质粒pPtrpChptA-Pltk的构建 | 第90页 |
| ·第一步置换DNA片段“B2TU-hpt：tk-D”的构建 | 第90页 |
| ·β_2-微管蛋白基因体外人工点突变 | 第90-91页 |
| ·两步同源置换法点突变β_2-微管蛋白基因 | 第91-93页 |
| ·对禾谷镰孢菌及其β_2-tub敲除\回复突变体对多菌灵的敏感性及生物学性质的研究 | 第93-94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-99页 |
| ·第一步和第二步置换DNA片段的构建和验证 | 第94-95页 |
| ·第一步置换突变体的筛选和验证 | 第95-96页 |
| ·第二步置换突变体的筛选和验证 | 第96-97页 |
| ·禾谷镰孢菌及其β_2-tub敲除\回复突变体对多菌灵的敏感性及生物学性质 | 第97-99页 |
| 3 讨论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-102页 |
| ABSTRACT | 第102-103页 |
| 第四章 禾谷镰孢菌β_1-微管蛋白基因人工点突变体对苯并咪唑类杀菌剂抗药性及其生物学特性 | 第103-117页 |
| 摘要 | 第103-104页 |
| 1 材料与方法 | 第104-107页 |
| ·供试菌株 | 第104页 |
| ·试剂 | 第104页 |
| ·质粒 | 第104页 |
| ·第一步同源置换DNA片段“B1TU-hpt：tk-D”的构建 | 第104页 |
| ·β_1-tub体外人工点突变 | 第104-105页 |
| ·两步置换法点突变β_1-微管蛋白基因 | 第105-107页 |
| ·对禾谷镰孢菌及其β_1-敲除\点突变体对多菌灵的敏感性及生物学性质的研究 | 第107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-113页 |
| ·第一步和第二步置换DNA片段的构建和验证 | 第107-108页 |
| ·第一步置换突变体的筛选和验证 | 第108-109页 |
| ·第二步置换突变体的筛选和验证 | 第109-110页 |
| ·禾谷镰孢菌及其β_1-tub敲除\点突变体对多菌灵的敏感性及生物学性质 | 第110-113页 |
| 3 讨论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-116页 |
| ABSTRACT | 第116-117页 |
| 全文结论 | 第117-119页 |
| 附录一 培养基及实验材料的制备方法 | 第119-122页 |
| 附录二 引物序列 | 第122-125页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
