| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-20页 |
| 目录 | 第20-24页 |
| 主要縮略词简表 | 第24-25页 |
| 第一章 前言 | 第25-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-47页 |
| 1 材料 | 第29-32页 |
| ·细胞系 | 第29页 |
| ·组织 | 第29页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第30-32页 |
| 2 方法 | 第32-47页 |
| ·质粒抽提 | 第32-33页 |
| ·pIRES/LTF重组载体构建 | 第33-34页 |
| ·稳定转染LTF细胞系的构建 | 第34-35页 |
| ·构建稳定干扰LTF的细胞系 | 第35页 |
| ·siRNA或miRNA产品转染细胞 | 第35页 |
| ·总RNA制备 | 第35-36页 |
| ·消化RNA中痕量DNA | 第36页 |
| ·逆转录 | 第36-37页 |
| ·实时荧光定量PCR(qPCR) | 第37-39页 |
| ·细胞总蛋白的抽提 | 第39页 |
| ·BCA法测蛋白浓度 | 第39页 |
| ·Western blot | 第39-40页 |
| ·免疫荧光实验 | 第40页 |
| ·免疫组化检测 | 第40-41页 |
| ·细胞生长曲线 | 第41页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第41页 |
| ·Transwell侵袭实验 | 第41-42页 |
| ·裸鼠实验 | 第42页 |
| ·免疫共沉淀结合质谱鉴定筛选LTF交互作用蛋白 | 第42-43页 |
| ·重组pGL3-enhancer报告载体的构建 | 第43-44页 |
| ·重组pMIR-REPORT luciferase荧光素酶报告载体的构建 | 第44页 |
| ·荧光素酶报告活性检测 | 第44页 |
| ·基因定点突变 | 第44-46页 |
| ·构建稳定表达miR-214的细胞系 | 第46页 |
| ·统计学分析 | 第46-47页 |
| 第三章 结果 | 第47-91页 |
| 第一部分 LTF抑制鼻咽癌生长与转移的分子机制研究 | 第47-80页 |
| ·稳定表达或干扰LTF的鼻咽癌细胞系的建立 | 第47-50页 |
| ·LTF在鼻咽癌细胞系中的表达 | 第47-48页 |
| ·重组表达载体pIRES-LTF的构建 | 第48页 |
| ·稳定表达LTF鼻咽癌细胞系的建立 | 第48页 |
| ·稳定干扰LTF鼻咽癌细胞系的建立 | 第48-50页 |
| ·LTF对鼻咽癌细胞增殖及恶性表型的影响 | 第50-56页 |
| ·LTF抑制鼻咽癌细胞生长增殖 | 第50页 |
| ·LTF抑制鼻咽癌细胞停泊非依赖性生长 | 第50-51页 |
| ·LTF抑制鼻咽癌细胞侵袭能力 | 第51-52页 |
| ·LTF抑制鼻咽癌细胞裸鼠成瘤及肺转移能力 | 第52-56页 |
| ·LTF抑制鼻咽癌生长转移的分子机制研究 | 第56-80页 |
| ·LTF对5-8F细胞基因表达谱的影响 | 第56-58页 |
| ·LTF抑制PDK1的表达 | 第58-59页 |
| ·LTF抑制PDK1的转录活性 | 第59-60页 |
| ·LTF通过抑制MAPK通路和c-Jun表达下调PDK1 | 第60-61页 |
| ·LTF抑制AKT通路活性 | 第61-62页 |
| ·PDK1拯救AKT Thr308磷酸化,但不能拯救Ser473磷酸化 | 第62-64页 |
| ·LTF相互作用蛋白的的分离和鉴定 | 第64页 |
| ·免疫共沉淀证实LTF与K18蛋白发生交互作用 | 第64-67页 |
| ·证实K18与14-3-3σ能在鼻咽癌细胞内结合 | 第67-68页 |
| ·干扰K18表达影响14-3-3蛋白在鼻咽癌细胞内的分布 | 第68-69页 |
| ·K18促进AKT通路激活及鼻咽癌细胞生长增殖 | 第69-71页 |
| ·K18不影响MAPK通路活性及PDK1表达 | 第71-72页 |
| ·LTF与K18相互作用阻止K18与14-3-3结合 | 第72-73页 |
| ·LTF过表达影响14-3-3亚细胞定位 | 第73页 |
| ·LTF阻止K18激活AKT通路 | 第73-74页 |
| ·过表达LTF解除K18引起的细胞生长优势 | 第74-76页 |
| ·LTF通过抑制AKT通路影响鼻咽癌细胞生长转移能力 | 第76-78页 |
| ·鼻咽癌中LTF的表达与AKT的磷酸化水平呈负相关 | 第78-80页 |
| 第二部分 鼻咽癌中LTF基因受miR-214靶向调控研究 | 第80-91页 |
| ·预测调控LTF的miRNA | 第80-81页 |
| ·荧光素酶报告检测 | 第81-82页 |
| ·miR-214在鼻咽癌细胞系中的表达 | 第82-83页 |
| ·miR-214对LTF表达的影响 | 第83-84页 |
| ·miR-214促进鼻咽癌细胞生长、侵袭 | 第84-85页 |
| ·建立稳定表达miR-214的鼻咽癌细胞系 | 第85页 |
| ·稳定表达miR-214促进鼻咽癌细胞裸鼠成瘤及肺转移 | 第85-87页 |
| ·miR-214通过靶向LTF激活AKT通路 | 第87-88页 |
| ·miR-214通过靶向LTF促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭 | 第88-89页 |
| ·miR-214通过AKT通路促进鼻咽癌细胞生长侵袭 | 第89页 |
| ·鼻咽癌中LTF低表达与miR-214高表达相关 | 第89-91页 |
| 第四章 讨论 | 第91-102页 |
| 第一部分 LTF抑制AKT通路影响鼻咽癌生长与转移 | 第91-99页 |
| 1.证实LTF在鼻咽癌中的抑瘤功能 | 第91-92页 |
| 2.LTF通过抑制MAPK通路下调PDK1 | 第92-94页 |
| 3.LTF部分通过下调PDK1抑制AKT通路激活 | 第94页 |
| 4.LTF与Keratin18在鼻咽癌细胞中发生交互作用 | 第94-95页 |
| 5.K18促进AKT激活,但不影响MAPK通路,并且K18能促进鼻咽癌细胞生长增殖 | 第95-96页 |
| 6.LTF通过与K18交互作用阻止K18与14-3-3蛋白结合,进而阻止K18激活AKT通路及其促进鼻咽癌细胞生长增殖 | 第96-97页 |
| 7.LTF通过AKT通路抑制鼻咽癌细胞生长转移 | 第97页 |
| 8.鼻咽癌中LTF的表达与AKT的磷酸化水平呈负相关 | 第97页 |
| 9.小结与展望 | 第97-99页 |
| 第二部分 鼻咽癌中LTF基因受miR-214靶向调控 | 第99-102页 |
| 1.miR-214靶向调控LTF表达 | 第99-100页 |
| 2.miR-214通过靶向抑制LTF影响AKT通路,促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力 | 第100页 |
| 3.鼻咽癌中LTF低表达与miR-214高表达相关 | 第100-101页 |
| 4.小结与展望 | 第101-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-112页 |
| 综述 | 第112-123页 |
| 参考文献 | 第117-123页 |
| 附件 | 第123-151页 |
| 附表1 通过基因芯片筛选的LTF上调基因 | 第123-136页 |
| 附表2 通过基因芯片筛选的LTF下调基因 | 第136-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
| 个人简历 | 第152-153页 |
