| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 英文縮略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-22页 |
| 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-41页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·细胞系 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-41页 |
| ·构建稳定转染SPLUNC1的HNE2细胞系 | 第26-28页 |
| ·HNE2/SPLUNC1和HNE2/GFP细胞感染EBV | 第28-29页 |
| ·构建瞬时转染SPLUNC1的NP69细胞系 | 第29页 |
| ·siRNA干扰SPLUNC1细胞的构建 | 第29-30页 |
| ·miRNA产品转染目的细胞 | 第30页 |
| ·ATRA处理细胞 | 第30页 |
| ·鼻咽癌标本及鼻咽慢性炎症对照标本采集 | 第30-32页 |
| ·组织细胞通过显微切割进行纯化 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR鉴定培养细胞目的基因mRNA的表达 | 第33-35页 |
| ·miRNA RealTime RT-PCR分析 | 第35-36页 |
| ·采用Western-blot对培养细胞进行目的蛋白质鉴定 | 第36-37页 |
| ·methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) | 第37页 |
| ·流式细胞仪分析细胞周期与细胞凋亡率 | 第37-38页 |
| ·免疫荧光试验 | 第38-39页 |
| ·免疫组化试验 | 第39页 |
| ·裸鼠成瘤试验 | 第39-40页 |
| ·统计学分析 | 第40-41页 |
| 第三章 结果 | 第41-75页 |
| 第一部分 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因表达的同时SPLUNC1自身表达受损 | 第41-47页 |
| ·细胞系SPLUNC1表达的筛选 | 第41页 |
| ·SPLUNC1稳定转染细胞系的构建 | 第41-45页 |
| ·SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因的表达 | 第45-46页 |
| ·EBV感染细胞导致SPLUNC1的表达降低 | 第46-47页 |
| 第二部分 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN-Akt通路影响NPC细胞的增殖和凋亡 | 第47-71页 |
| ·SPLUNC1影响NP69细胞和NPC细胞miR-141的表达 | 第47-52页 |
| ·miR-141调控NP69细胞和NPC细胞PTEN的表达 | 第52-53页 |
| ·SPLUNC1通过miR-141调控PTEN的表达 | 第53-59页 |
| ·SPLUNC1通过PTEN影响Akt信号通路 | 第59-64页 |
| ·SPLUNC1通过PTEN-Akt通路影响NPC细胞的增殖和凋亡 | 第64-67页 |
| ·裸鼠实验证实SPLUNC1影响PTEN-Akt信号通路 | 第67-71页 |
| 第三部分 EBV与SPLUNC1相互影响共同调控miR-141-PTEN-Akt信号通路 | 第71-75页 |
| ·LMP1通过抑制SPLUNC1影响miR-141-PTEN-Akt信号通路 | 第71-73页 |
| ·NP69-LMP1中恢复SPLUNC1的表达能重新失活Akt通路 | 第73-75页 |
| 第四章 讨论 | 第75-86页 |
| 第一部分 SPLUNC1抑制整合入细胞内EBV关键基因表达的同时SPLUNC1自身表达受损 | 第75-77页 |
| 第二部分 SPLUNC1通过miR-141调控PTEN-Akt信号通路影响NPC细胞增殖和凋亡 | 第77-83页 |
| 第三部分 EBV与SPLUNC1相互影响共同调控miR-141-PTEN-Akt信号通路 | 第83-84页 |
| 第四部分 尚需继续研究的课题 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-98页 |
| 综述一 | 第98-112页 |
| 参考文献 | 第105-112页 |
| 综述二 | 第112-125页 |
| 参考文献 | 第119-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第127-128页 |
