| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-28页 |
| ·粪类圆线虫 | 第13-17页 |
| ·粪类圆线虫概述 | 第13-16页 |
| ·粪类圆线虫的生活史 | 第13-14页 |
| ·粪类圆线虫形态学 | 第14-15页 |
| ·粪类圆线虫致病性及诊断 | 第15页 |
| ·粪类圆线虫病预防与治疗 | 第15页 |
| ·粪类圆线虫的研究前景 | 第15-16页 |
| ·粪类圆线虫的相关研究 | 第16-17页 |
| ·RIO蛋白激酶 | 第17-24页 |
| ·RIO激酶的结构 | 第18-21页 |
| ·RIO激酶的功能 | 第21-22页 |
| ·RIO激酶体外表达及其生物学特性 | 第22-23页 |
| ·RIO激酶与核酸的结合方式 | 第23-24页 |
| ·在粪类圆线虫中运用的转基因技术 | 第24-28页 |
| ·性腺显微注射技术 | 第24-26页 |
| ·神经元消融法 | 第26页 |
| ·RNAi | 第26-28页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 3 材料与方法 | 第30-52页 |
| ·试验材料 | 第30-32页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·菌种与质粒 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·抗生素与培养基的配制 | 第31页 |
| ·质粒提取缓冲液配制 | 第31页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第31-32页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-52页 |
| ·粪类圆线虫的保种及各阶段虫体的收集 | 第32-33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33-35页 |
| ·虫体RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·虫体DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·粪类圆线虫18srRNA部分序列的扩增 | 第37页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第38页 |
| ·目的片段的连接 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌细胞感受态的制备(氯化钙法) | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·质粒DNA的小量制备与鉴定(碱裂解法) | 第39-40页 |
| ·PCR鉴定 | 第40页 |
| ·酶切质粒鉴定(双酶切) | 第40-41页 |
| ·合成粪类圆线虫RIO3基因的cDNA序列 | 第41-42页 |
| ·RACE扩增cDNA序列 | 第42-44页 |
| ·完整粪类圆线虫RIO3 gDNA序列 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR扩增粪类圆线虫RIO3基因的ORF序列 | 第45-46页 |
| ·目的片段的回收、连接(PMD-19-T)、转化 | 第46页 |
| ·重组质粒的小量提取及双酶切鉴定和PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·表达质粒的构建 | 第47页 |
| ·表达质粒的小量提取与鉴定 | 第47页 |
| ·表达质粒的诱导表达 | 第47页 |
| ·Western blot分析 | 第47-48页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因序列的截短原核表达 | 第48页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的大量提取与纯化 | 第49页 |
| ·初步检测蛋白激酶的活性 | 第49页 |
| ·RT-PCR检测粪类圆线虫各个时期RIO3基因的转录水平 | 第49-50页 |
| ·RIO3启动子序列的获得 | 第50-51页 |
| ·绿荧光表达质粒的构建 | 第51页 |
| ·性腺显微注射粪类圆线虫自由生活的雌虫 | 第51-52页 |
| 4 结果与分析 | 第52-77页 |
| ·粪类圆线虫的保种及各个阶段虫体的收集 | 第52-53页 |
| ·粪类圆线虫18s rRNA序列的检测 | 第53页 |
| ·粪类圆线虫L3期幼虫RNA的提取 | 第53-54页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因全长cDNA序列的获得 | 第54-56页 |
| ·粪类圆线虫RIO3编码的氨基酸序列同源性分析 | 第56-60页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因gDNA序列的获得 | 第60-61页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因结构的分析 | 第61-63页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因启动子的获得 | 第63-64页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因启动子元件的分析 | 第64-65页 |
| ·粪类圆线虫RIO3全长序列表达质粒的构建与鉴定 | 第65-66页 |
| ·RIO3截短序列表达质粒的构建与鉴定 | 第66-68页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第68-73页 |
| ·RIO3全长序列重组蛋白的诱导表达 | 第68-69页 |
| ·RIO3截短序列重组蛋白的诱导表达 | 第69-71页 |
| ·最佳诱导条件的确定及蛋白的大量提取 | 第71-73页 |
| ·重组蛋白激酶活性的初步检测 | 第73-74页 |
| ·粪类圆线虫各阶段虫体的RIO3基因转录水平 | 第74-75页 |
| ·RIO3基因启动子序列绿荧光表达载体的构建 | 第75-77页 |
| 5 讨论 | 第77-83页 |
| ·实验材料的收集 | 第77页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因序列的分析 | 第77-79页 |
| ·粪类圆线虫RIO3激酶的体外表达 | 第79-80页 |
| ·蛋白激酶活性的测定 | 第80-81页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因在各发育阶段的转录水平 | 第81-82页 |
| ·粪类圆线虫RIO3基因的空间表达 | 第82-83页 |
| 6 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 附录 | 第93-96页 |
