| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-18页 |
| ·蛋白质表达体系 | 第10-14页 |
| ·原核表达体系 | 第10-12页 |
| ·大肠杆菌表达体系 | 第10-11页 |
| ·芽孢杆菌表达体系 | 第11页 |
| ·链霉菌表达体系 | 第11-12页 |
| ·真核表达体系 | 第12-14页 |
| ·酵母表达体系 | 第12页 |
| ·昆虫表达体系 | 第12-13页 |
| ·哺乳动物表达体系 | 第13页 |
| ·植物表达体系 | 第13-14页 |
| ·左旋多巴及其衍生物 | 第14-16页 |
| ·左旋多巴 | 第14页 |
| ·左旋多巴的来源途径 | 第14-15页 |
| ·左旋多巴的给药方法 | 第15页 |
| ·左旋多巴的修饰 | 第15-16页 |
| ·左旋多巴类化合物的其他应用 | 第16页 |
| ·本课题的选题意义及主要内容 | 第16-18页 |
| 第二章 PEPT2(1-174)和 PEPT2(624-729)表达体系的构建及蛋白的表达 | 第18-34页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·数据库及分析软件 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·常用试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·PET30A(+)/HPEPT2(1-174)/BL21(DE3)表达体系的构建 | 第20-25页 |
| ·寡肽转运蛋白 HPEPT2 (1-174)基因的扩增 | 第20-21页 |
| ·寡肽转运蛋白 hPepT2 (1-174)基因序列引物设计 | 第20-21页 |
| ·hPepT2 (1-174)基因的 PCR 扩增 | 第21页 |
| ·PMD18-T/HPEPT2 (1-174)/ DH5 重组克隆体系的构建[93] | 第21-22页 |
| ·CaCl2法制备 DH5 感受态细胞 | 第21页 |
| ·pMD18-T/hPepT2 (1-174)重组克隆质粒的构建 | 第21-22页 |
| ·pMD18-T/hPepT2 (1-174)重组克隆质粒的转化与筛选 | 第22页 |
| ·pMD18-T/hPepT2 (1-174)重组克隆质粒的鉴定 | 第22页 |
| ·PET30A(+)/HPEPT2 (1-174)/BL21(DE3)重组表达体系的构建 | 第22-24页 |
| ·pET30a(+)载体质粒和 pMD18-T/hPepT2(1-174)重组质粒的制备 | 第22-23页 |
| ·pMD18-T/hPepT2(1-174)和 pET30a(+)质粒的酶切 | 第23页 |
| ·pET30a(+)/hPepT2 (1-174)重组表达质粒的构建 | 第23页 |
| ·pET30a(+)/hPepT2 (1-174)重组表达质粒的转化 | 第23页 |
| ·pET30a(+)/hPepT2 (1-174)重组表达质粒的鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组表达质粒 PET30A(+)/HPEPT2 (1-174)的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·pET30a(+)/hPepT2 (1-174)的诱导表达 | 第24页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 检测 | 第24-25页 |
| ·PUC18/PEPT2(624-729)/BL21(DE3)表达体系的构建 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增 PEPT2(624-729)基因片段 | 第25页 |
| ·PUC18/PEPT2(624-729)重组质粒的构建与鉴定 | 第25-26页 |
| ·pUC18 质粒和 PCR 产物 PepT2(624-729)的双酶切 | 第25页 |
| ·pUC18/hPepT2(624-729)重组质粒的构建与转化 | 第25-26页 |
| ·pUC18/hPepT2(624-729)重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·PUC18/HPEPT2(624-729)重组质粒的诱导表达 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-32页 |
| ·目的基因的 PCR | 第26-28页 |
| ·PET30A(+)/HPEPT2(1-174)/BL21(DE3)表达体系的构建 | 第28-31页 |
| ·pET30a(+)载体质粒的制备 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·pMD18-T/hPepT2(1-174)重组克隆质粒的构建及转化 | 第28-29页 |
| ·pMD18-T/hPepT2(1-174)重组克隆质粒的 PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·pET30a(+)/hPepT2(1-174)重组表达质粒的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·pET30a(+)/hPepT2(1-174)重组表达质粒的序列分析 | 第31页 |
| ·PUC18/HPEPT2(624-729)/BL21(DE3)重组表达体系的构建 | 第31-32页 |
| ·pUC18/hPepT2(624-729) 重组质粒的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·pUC18/hPepT2(624-729) 重组质粒的序列分析 | 第32页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第32页 |
| ·本章小结 | 第32-34页 |
| 第三章 左旋多巴肽类化合物的合成及其与 DNA 的相互作用 | 第34-54页 |
| ·实验材料与方法 | 第34-37页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| ·实验试剂 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·L-dopa-L-Tyr 的合成 | 第35-36页 |
| ·L-dopa-L-His 的合成 | 第36页 |
| ·L-dopa-L-Tyr-L-Tyr 的合成 | 第36页 |
| ·高效液相色谱分离纯化 | 第36页 |
| ·质谱分析及核磁分析 | 第36页 |
| ·溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·紫外光谱法研究左旋多巴及其修饰物与 ctDNA 的相互作用 | 第37页 |
| ·荧光光谱法研究左旋多巴及其修饰物与 ctDNA 的相互作用 | 第37页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳法研究左旋多巴及其修饰物与 pUC18 DNA 的相互作用 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-53页 |
| ·L-DOPA-L-TYR 的合成及其与 DNA 相互作用研究 | 第37-44页 |
| ·L-dopa-L-Tyr 的液相色谱纯化及质谱检测 | 第37-38页 |
| ·L-dopa-L-Tyr 的核磁表征 | 第38-39页 |
| ·紫外光谱法研究 L-dopa 及 L-dopa-L-Tyr 与 ctDNA 的相互作用 | 第39-41页 |
| ·荧光光谱法研究 L-dopa 及 L-dopa-L-Tyr 与 ctDNA 的相互作用 | 第41-43页 |
| ·凝胶电泳法研究 L-dopa-L-Tyr 与 pUC18 DNA 的相互作用[100] | 第43-44页 |
| ·L-DOPA-L-HIS 的合成及其与 DNA 相互作用研究 | 第44-48页 |
| ·L-dopa-L-His 液相色谱纯化及质谱检测 | 第44-45页 |
| ·L-dopa-L-His 的核磁表征 | 第45-46页 |
| ·紫外光谱法研究 L-dopa-L-His 与 ctDNA 的相互作用 | 第46页 |
| ·荧光光谱法研究 L-dopa-L-His 与 ctDNA 的相互作用 | 第46-48页 |
| ·凝胶电泳法研究 L-dopa-L-His 与 pUC18 DNA 的相互作用 | 第48页 |
| ·L-DOPA-L-TYR-L-TYR 的合成及其与 DNA 相互作用研究 | 第48-53页 |
| ·L-dopa-L-Tyr-L-Tyr 液相色谱纯化及质谱检测 | 第48-49页 |
| ·L-dopa-L-Tyr-L-Tyr 的核磁表征 | 第49-51页 |
| ·紫外光谱法研究 L-dopa-L-Tyr-Tyr 与 ctDNA 的相互作用 | 第51页 |
| ·荧光光谱法研究 L-dopa-L-Tyr-Tyr 与 ctDNA 的相互作用 | 第51-52页 |
| ·凝胶电泳法研究 L-dopa-L-Tyr-Tyr 与 pUC18 DNA 的相互作用 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
