中文摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
英文缩略语 | 第8-10页 |
前言 | 第10-12页 |
材料和方法 | 第12-32页 |
1.实验材料 | 第12-19页 |
·主要化学试剂及抗体 | 第12页 |
·主要工具酶、分子量标准和试剂盒 | 第12页 |
·引物 | 第12-13页 |
·菌株及质粒载体 | 第13-14页 |
·细胞株 | 第14页 |
·仪器设备 | 第14-15页 |
·实验动物 | 第15页 |
·溶液配制 | 第15-19页 |
2.方法 | 第19-32页 |
·hBAFF_(83-285)基因的克隆和表达载体的构建 | 第19-21页 |
·hBAFF_(83-285)-His蛋白的原核表达及纯化 | 第21-22页 |
·hsBAFF基因的克隆、原核表达及纯化 | 第22页 |
·pGEX-4T-1/hsBAFF表达载体的构建 | 第22页 |
·GST-hsBAFF蛋白的原核表达及纯化 | 第22-23页 |
·蛋白质浓度测定 | 第23-24页 |
·抗hBAFF_(83-285)单克隆抗体的制备 | 第24-26页 |
·抗hBAFF_(83-285)单克隆抗体特异性鉴定 | 第26-27页 |
·单克隆抗体的亚类鉴定及纯化 | 第27-28页 |
·辣根过氧化物酶标记抗体 | 第28-29页 |
·ELISA检测HRP标记抗体的合适稀释度 | 第29页 |
·抗hsBAFF蛋白单克隆抗体之间配对实验和可配对抗体灵敏度检测 | 第29-30页 |
·抗GST-hsBAFF多克隆抗体的制备 | 第30页 |
·兔多抗血清的鉴定 | 第30-32页 |
结果 | 第32-53页 |
1.pET-30a(+)/hBAFF_(83-285)重组质粒的构建及鉴定 | 第32页 |
2.hBAFF_(83-285)基因的原核表达及纯化 | 第32-34页 |
3.hsBAFF基因的克隆、原核表达及纯化 | 第34-36页 |
4.重组蛋白浓度测定 | 第36-38页 |
5.重组hBAFF_(83-285)-His蛋白免疫小鼠效果检测 | 第38-39页 |
6.抗hsBAFF单克隆抗体特异性鉴定 | 第39-44页 |
7.抗hsBAFF单克隆抗体的亚类鉴定及纯化 | 第44-45页 |
8.HRP标记单克隆抗体结果检测 | 第45-46页 |
9.抗hsBAFF单抗初步建立检测hsBAFF的双抗体夹心ELISA方法 | 第46-47页 |
10.pGEX-4T-1/hsBAFF表达载体的构建 | 第47页 |
11.GST-hsBAFF蛋白的原核表达 | 第47-48页 |
12.GST-hsBAFF蛋白的纯化 | 第48-49页 |
13.GST融合蛋白定量及免疫新西兰兔免疫效果检测 | 第49-50页 |
14.兔多抗血清的鉴定 | 第50-53页 |
讨论 | 第53-57页 |
小结 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-60页 |
综述 | 第60-68页 |
附录 | 第68-72页 |
致谢 | 第72页 |