| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·干扰素 | 第12-15页 |
| ·干扰素的分类 | 第12-14页 |
| ·干扰素a-2b(IFNa-2b) | 第14-15页 |
| ·胸腺肽 | 第15-18页 |
| ·胸腺肽的概述 | 第16页 |
| ·胸腺肽α_1的理化性质及生物学作用 | 第16-17页 |
| ·胸腺肽α_1的生产方法 | 第17-18页 |
| ·胸腺肽α_1的应用前景 | 第18页 |
| ·IFNa-2b和THYa_1融合蛋白 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19-27页 |
| ·用大肠杆菌进行基因表达的一般策略 | 第19-20页 |
| ·影响基因重组蛋白质在大肠杆菌中表达的因素 | 第20-23页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的表达形式 | 第23-26页 |
| ·大肠杆菌中的融合表达体系 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白的包涵体研究 | 第27-30页 |
| ·包涵体的形成与性质 | 第27-28页 |
| ·包涵体的变性与体外复性 | 第28-30页 |
| ·融合蛋白的分离纯化 | 第30-32页 |
| ·离子交换层析 | 第30页 |
| ·单克隆抗体亲和层析 | 第30页 |
| ·金属螯合层析 | 第30页 |
| ·疏水层析 | 第30-31页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第31-32页 |
| 第二章 重组人干扰素α_(2b)和胸腺肽α_1融合蛋白的分子设计及基因工程菌的构建原理 | 第32-38页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·重组人干扰素α_(2b)和胸腺肽α_1融合蛋白的分子设计的原理 | 第32-33页 |
| ·人干扰素α_(2b)和胸腺肽α_1融合蛋白结构基因的设计 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取及转化 | 第34-36页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·质粒的转化 | 第35-36页 |
| ·保存菌种 | 第36页 |
| ·小结 | 第36-38页 |
| 第三章 基因工程大肠杆菌发酵条件的研究 | 第38-48页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·试验材料与仪器 | 第38-39页 |
| ·试验材料 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·菌种活化 | 第39-40页 |
| ·种子液的培养 | 第40页 |
| ·发酵培养 | 第40页 |
| ·发酵过程各因素的影响 | 第40-41页 |
| ·培养时间对基因工程菌生长的影响 | 第40页 |
| ·诱导条件的影响 | 第40-41页 |
| ·分析方法 | 第41页 |
| ·实验结果与分析 | 第41-45页 |
| ·基因工程菌的生长 | 第41-42页 |
| ·不同诱导时机及诱导时间对融合蛋白表达量的影响 | 第42-43页 |
| ·IPTG及Kna对融合蛋白表达量的影响 | 第43-44页 |
| ·正交实验结果分析 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-48页 |
| 第四章 重组人干扰素α_(2b)和胸腺肽α_1融合蛋白包涵体的变性以及复性的研究 | 第48-58页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料和仪器 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·实验仪器 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·包涵体的制备 | 第49-50页 |
| ·粗制包涵体的洗涤 | 第50页 |
| ·包涵体的溶解变性 | 第50页 |
| ·包涵体变性液的复性研究 | 第50-51页 |
| ·复性沉淀再回收利用 | 第51页 |
| ·分析方法 | 第51-52页 |
| ·实验结果与分析 | 第52-57页 |
| ·细胞破碎与包涵体制备 | 第52页 |
| ·重组人干扰素α_(2b_和胸腺肽α_1融合蛋白包涵体的洗涤 | 第52-53页 |
| ·重组人干扰素α_(2b)和胸腺肽α_1融合蛋白复性 | 第53-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 重组人干扰素α_(2b)和胸腺肽α_1融合蛋白的分离纯化的研究 | 第58-68页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·实验材料和仪器 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验仪器 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-61页 |
| ·DEAE离子交换层析 | 第59页 |
| ·SPFF离子交换层析 | 第59页 |
| ·Ni-Sepharose亲和层析 | 第59-60页 |
| ·疏水层析 | 第60-61页 |
| ·金属螯合层析和阳离子交换层析联用 | 第61页 |
| ·分析方法 | 第61页 |
| ·实验结果与分析 | 第61-66页 |
| ·DEALS离子交换层析 | 第61-63页 |
| ·SPFF离子交换层析 | 第63-64页 |
| ·金属螯合层析 | 第64-65页 |
| ·疏水层析 | 第65-66页 |
| ·金属螯合层析和阳离子交换层析联用 | 第66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 第六章 重组人干扰素α_(2b)和胸腺肽α_1融合蛋白的酶切及进一步分离纯化的研究 | 第68-74页 |
| ·引言 | 第68页 |
| ·实验材料和仪器 | 第68-69页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·实验仪器 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69页 |
| ·酶切 | 第69页 |
| ·金属螯合层析除组氨酸 | 第69页 |
| ·凝胶过滤层析SephadexG-50 | 第69页 |
| ·分析方法 | 第69-70页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第69-70页 |
| ·酶联质谱检测 | 第70页 |
| ·融合蛋白的RP-HPLC分析 | 第70页 |
| ·实验结果与分析 | 第70-72页 |
| ·融合蛋白的酶切鉴定 | 第70页 |
| ·金属螯合层析除组氨酸及G-50凝胶层析 | 第70-71页 |
| ·融合蛋白的序列鉴定 | 第71-72页 |
| ·融合蛋白的纯度鉴定 | 第72页 |
| ·本章小结 | 第72-74页 |
| 第七章 结论与建议 | 第74-76页 |
| ·结论 | 第74-75页 |
| ·建议 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附录 | 第80-84页 |
| 附录一 各种试剂的配制 | 第80-83页 |
| 附录二 培养基 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第86-88页 |
| 作者和导师简介 | 第88-89页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第89-90页 |
