主要英文缩略词 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
前言 | 第12-21页 |
材料与方法 | 第21-27页 |
一、实验材料 | 第21-22页 |
1. 菌株、质粒及cDNA 文库 | 第21页 |
2. 主要试剂 | 第21页 |
3. 主要仪器设备 | 第21-22页 |
二、 实验方法 | 第22-27页 |
1. 分子克隆技术 | 第22页 |
2. Y2H 相互作用蛋白质回转验证 | 第22-24页 |
3. 蛋白质免疫印记 | 第24-25页 |
4. 免疫共沉淀 | 第25页 |
5. GST- pull down | 第25页 |
6. 双荧光素酶报告基因实验 | 第25-26页 |
7. RT-PCR | 第26页 |
8. 实时定量PCR | 第26页 |
9. 胞核胞质蛋白质的提取 | 第26页 |
10. 免疫荧光 | 第26页 |
11. 统计学分析 | 第26-27页 |
结果与分析 | 第27-44页 |
一、KPNA2 与c-Jun 存在相互作用 | 第27-34页 |
1. Y2H 回转验证 | 第27页 |
2. 免疫共沉淀验证 | 第27-29页 |
3. GST- pull down 验证 | 第29-31页 |
4. KPNA2 的C 端酸性结构域与c-Jun 的C 端亮氨酸拉链区域介导二者相互作用 | 第31-34页 |
二、高表达KPNA2 对c-Jun 的亚细胞定位以及AP-1 的转录活性均无影响 | 第34-36页 |
1. 高表达KPNA2对c-Jun的亚细胞定位没有影响 | 第34-35页 |
2. 高表达KPNA2对AP-1的转录活性没有影响 | 第35-36页 |
三、KPNA2 与c-Jun 的相互作用在调节c-Jun 的亚细胞定位及AP-1 转录活性中起重要作用 | 第36-40页 |
1. AICAR 处理解离KPNA2 与c-Jun 的相互作用 | 第36-37页 |
2. AICAR 处理阻断c-Jun 的核转位 | 第37-38页 |
3. AICAR 处理降低AP-1 的转录活性 | 第38页 |
4. RNA 干扰KPNA2 体系的建立 | 第38-40页 |
四、Importin α家族的其他成员也可以与c-Jun 发生相互作用 | 第40-42页 |
1. 载体pDBleu-KPNA1和pFLAG-CMV-2-KPNA1的构建和表达 | 第40-41页 |
2. 酵母双杂交检测KPNA1与c-Jun的相互作用 | 第41页 |
3. 免疫共沉淀检测KPNA1与c-Jun的相互作用 | 第41-42页 |
五、高表达KPNA2 对AP-1 下游基因的影响 | 第42-44页 |
讨论 | 第44-46页 |
结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-50页 |
附录 | 第50-56页 |
文献综述 | 第56-64页 |
在读期间发表或投稿的论文 | 第64-65页 |
个人简历 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |