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转基因水稻Bt汕优63外源插入结构验证和定量检测方法建立

摘要第1-6页
Abstract第6-10页
第一章 前言第10-25页
   ·转基因作物与其生物安全性第10-12页
     ·转基因产品第10页
     ·全球转基因作物的种植情况第10-11页
     ·转基因作物的安全性第11-12页
   ·转基因作物检测技术研究进展第12-20页
     ·PCR 检测技术的研究进展第12-18页
     ·酶联免疫吸附检测技术的研究进展第18-19页
     ·其它检测技术的研究进展第19-20页
   ·转基因水稻的培育情况第20-23页
     ·水稻的遗传转化第20-21页
     ·水稻遗传改良的性状第21-23页
     ·我国转基因水稻的培育情况第23页
   ·研究的目的和研究内容第23-25页
     ·研究目的第23-24页
     ·研究内容第24-25页
第二章 转基因水稻BT 汕优63 的外源插入结构验证第25-37页
   ·实验材料第25-26页
   ·实验方法第26-31页
     ·温室水稻的种植第26页
     ·水稻总DNA 的小量提取第26-28页
     ·水稻DNA 的扩增性检测第28页
     ·外源转基因成分的PCR 检测第28-29页
     ·长链PCR(long distance PCR,LD-PCR)第29-30页
     ·品系特异性检测第30-31页
   ·结果与分析第31-35页
     ·水稻基因组DNA 的提取和内源actin 基因的验证第31-32页
     ·转基因水稻Bt 汕优63 外源基因整合的定性PCR 检测第32-33页
     ·转基因水稻Bt 汕优63 外源基因的构造检测第33-34页
     ·旁侧基因组序列的验证第34-35页
     ·水稻Bt 汕优63 自交下一代分离比的检测第35页
   ·结论与讨论第35-37页
第三章 转基因水稻BT 汕优63 品系特异性定量PCR 检测体系的构建第37-55页
   ·材料与试剂第37-38页
     ·材料第37页
     ·生化试剂及配置第37-38页
   ·实验方法第38-44页
     ·水稻DNA 的大量提取第38-39页
     ·制备不同含量的转基因水稻Bt 汕优63 样品第39页
     ·引物设计第39-40页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳第40-41页
     ·构建标准分子第41-44页
     ·SYBR Green 实时荧光定量PCR第44页
   ·结果与讨论第44-52页
     ·制备不同转基因水稻含量的混合样品第44-45页
     ·优化3′端侧翼序列引物第45-46页
     ·转基因水稻Bt 汕优63 转化事件特异性定量检测第46-52页
   ·结论与讨论第52-55页
第四章 转基因水稻BT 汕优63 外源基因MRNA 水平表达检测第55-68页
   ·材料与试剂第55-56页
     ·材料第55页
     ·实验试剂第55-56页
     ·引物设计第56页
   ·实验方法第56-57页
     ·水稻叶片RNA 的提取第56页
     ·RNA 电泳第56-57页
     ·反转录体系第57页
     ·PCR 反应体系第57页
     ·构建标准分子第57页
     ·SYBR Green 实时荧光定量PCR第57页
   ·结果与分析第57-66页
     ·提取总RNA 浓度测定及电泳结果第57-58页
     ·外源基因RNA 表达的RT-PCR 检测第58-61页
     ·标准曲线制作第61-65页
     ·转基因水稻不同时期目的基因mRNA 水平表达的定量检测第65-66页
   ·讨论第66-68页
第五章 全文结论第68-69页
   ·转基因水稻外源结构的初步检测和验证第68页
   ·建立转基因水稻转化事件特异性定量检测体系第68页
   ·建立转基因水稻目的基因 mRNA 水平上表达的定量检测体系第68-69页
参考文献第69-77页
致谢第77-78页
作者简介第78页

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