| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-37页 |
| 二化螟 | 第12-18页 |
| 1 分布与危害 | 第12页 |
| 2 发生情况 | 第12页 |
| 3 发生原因分析 | 第12-13页 |
| ·气候变化 | 第12-13页 |
| ·耕作栽培制度与水稻品种的变化 | 第13页 |
| ·天敌控制作用的减弱 | 第13页 |
| ·抗药性的发展 | 第13页 |
| 4 抗药性现状 | 第13-14页 |
| ·敏感期 | 第13-14页 |
| ·抗性发展期 | 第14页 |
| ·多种抗性发展期 | 第14页 |
| 5 抗药性产生的机制 | 第14-18页 |
| ·表皮穿透 | 第14-15页 |
| ·解毒酶的代谢及结合作用增强 | 第15-16页 |
| ·多功能氧化酶系 | 第15页 |
| ·酯酶 | 第15-16页 |
| ·谷胱甘肽-S-转移酶 | 第16页 |
| ·DDT-脱氯化氢酶 | 第16页 |
| ·靶标敏感性下降 | 第16-17页 |
| ·γ-氨基丁酸门控氯离子通道 | 第16页 |
| ·钠离子通道 | 第16-17页 |
| ·烟碱型乙酰胆碱 | 第17页 |
| ·乙酰胆碱酯酶 | 第17页 |
| ·蛋白质的结合作用 | 第17-18页 |
| 转基因植物 | 第18-25页 |
| 1 转基因的方法 | 第18-19页 |
| ·基因枪法 | 第18页 |
| ·PEG诱导法 | 第18页 |
| ·电击法 | 第18页 |
| ·花粉管通道法 | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导的基因转化法 | 第19页 |
| ·其他方法 | 第19页 |
| 2 Bt转Bt基因作物 | 第19-21页 |
| ·转Bt基因烟草 | 第19页 |
| ·转Bt基因棉花7 | 第19-20页 |
| ·转Bt基因马铃薯 | 第20页 |
| ·转Bt基因豆类作物 | 第20页 |
| ·转Bt基因花生 | 第20页 |
| ·转Bt基因玉米 | 第20页 |
| ·转Bt基因高粱 | 第20页 |
| ·转Bt基因水稻 | 第20-21页 |
| 3 转基因作物的生态风险 | 第21-24页 |
| ·转基因作物基因漂流导致的杂草化问题 | 第22页 |
| ·转基因作物本身"杂草化" | 第22页 |
| ·转基因作物通过"基因漂移"使杂草成为"超级杂草" | 第22页 |
| ·转基因作物抗虫作物的潜在风险 | 第22页 |
| ·转基因作物对非靶标生物和生物多样性的影响 | 第22-24页 |
| ·对非靶标生物的影响 | 第22-23页 |
| ·对生态系统多样性的影响 | 第23-24页 |
| ·转基因作物的食品安全性分析 | 第24页 |
| 4 保障转基因作物的生态安全性措施 | 第24-25页 |
| ·加强对转基因作物的安全性评价 | 第25页 |
| ·采用生殖隔离,阻断转基因花粉的漂移 | 第25页 |
| ·转基因遗传调控 | 第25页 |
| ·推广时种植一定比例的非转基因同类作物 | 第25页 |
| 苏云金菌芽孢杆菌 | 第25-37页 |
| 1 Bt的发现和历史 | 第25-26页 |
| 2 Bt基因的分类与命名 | 第26-27页 |
| ·Hofte分类法 | 第26-27页 |
| ·Crickmore分类法(Crickmore et al.,1998) | 第27页 |
| ·其它分类方法 | 第27页 |
| 3 Bt晶体蛋白的结构功能关系 | 第27-28页 |
| 4 Bt的杀虫机理 | 第28-29页 |
| 5 Bt毒素的结合受体 | 第29-33页 |
| ·受体与Bt毒素的结合动力学 | 第29-30页 |
| ·钙粘蛋白(Cadherin-like protein,CAD) | 第30-31页 |
| ·类钙粘蛋白的结构特征 | 第30页 |
| ·类钙粘蛋白与毒素的结合特性 | 第30-31页 |
| ·GPI锚定蛋白(GPI-anchored protein) | 第31-32页 |
| ·氨肽酶 | 第31-32页 |
| ·碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatese,ALP) | 第32页 |
| ·其他类型受体 | 第32-33页 |
| 6 Bt的抗性机理 | 第33-35页 |
| ·昆虫体内可能对Bt产生抗性的环节 | 第33页 |
| ·三种主要的抗性机理 | 第33-35页 |
| ·蛋白酶水解发生变化 | 第33-34页 |
| ·中肠受体的变异 | 第34-35页 |
| ·中肠上皮的缺失修复作用 | 第35页 |
| 7 Bt的抗性遗传方式及抗性风险评估 | 第35-37页 |
| ·Bt的抗性遗传方式 | 第35页 |
| ·Bt抗性风险评估 | 第35-37页 |
| 第二章 二化螟对Cry1Ab抗性筛选及抗性风险评估 | 第37-44页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| ·试验材料 | 第38-39页 |
| ·供试昆虫及其饲养 | 第38页 |
| ·供试药剂 | 第38页 |
| ·试验器材 | 第38页 |
| ·二化螟人工饲料 | 第38-39页 |
| ·生物测定方法(毒素涂表法) | 第39页 |
| ·二化螟对Cry1A毒素敏感毒力基线的建立 | 第39页 |
| ·抗性品系的筛选 | 第39页 |
| ·抗性现实遗传力 | 第39页 |
| ·抗性预测 | 第39-40页 |
| ·数据分析 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-42页 |
| ·敏感毒力基线的建立 | 第40页 |
| ·抗性筛选 | 第40页 |
| ·二化螟对Cry1Ab抗性现实遗传力 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 二化螟中肠受体与Cry1A毒素结合分析 | 第44-54页 |
| 1 材料和方法 | 第45-48页 |
| ·试验材料 | 第45页 |
| ·供试昆虫 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-48页 |
| ·二化螟中肠BBMV的制备 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第46-47页 |
| ·Cry1A毒素生物素(biotin)标记 | 第47页 |
| ·Cry1A毒素与受体的配基结合 | 第47-48页 |
| ·Cry1A毒素竞争结合 | 第48页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-51页 |
| ·SDS-PAGE电泳结果 | 第48-49页 |
| ·Cry1A毒素与二化螟中肠BBMV配基结合 | 第49-50页 |
| ·二化螟中肠BBMV与Cry1Ab毒素的同源竞争结合 | 第50页 |
| ·二化螟中肠BBMV与Cry1Ac毒素的竞争结合 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-54页 |
| 第四章 二化螟中肠APN类受体基因片段克隆 | 第54-67页 |
| 1 材料和方法 | 第55-56页 |
| ·材料和试剂 | 第55页 |
| ·细菌培养基 | 第55页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·仪器设备 | 第56页 |
| 2 试验方法 | 第56-60页 |
| ·RNA的提取(SV Total Isotation system) | 第56页 |
| ·Invitrogen:M-MLV反转录 | 第56-57页 |
| ·cDNA模板质量检测 | 第57页 |
| ·兼并引物扩增 | 第57-58页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第58页 |
| ·PCR纯化产物与质粒载体的连接 | 第58页 |
| ·转化 | 第58-59页 |
| ·细菌的扩大培养 | 第59页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第59-60页 |
| ·酶切反应 | 第60页 |
| ·目标片段检测 | 第60页 |
| ·序列分析与系统发育树的构建 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-66页 |
| ·检测cDNA模板 | 第60-61页 |
| ·兼并引物扩增结果 | 第61页 |
| ·二化螟氨肽酶受体基因的cDNA片段的克隆与序列分析 | 第61-64页 |
| ·二化螟APN基因的系统进化分析 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 全文总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-87页 |
| 附录:发表的学术论文 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
