| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.棉纤维发育相关基因和棉纤维基因工程 | 第12-20页 |
| ·棉纤维发育的分子机制 | 第13-18页 |
| ·棉纤维基因工程的研究现状 | 第18-20页 |
| 2.启动子克隆及其功能研究的方法 | 第20-28页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第20-25页 |
| ·启动子的功能研究方法 | 第25页 |
| ·棉花纤维特异启动子研究的意义与作用 | 第25-26页 |
| ·β-甘露糖苷酶基因研究进展及本研究的目的意义 | 第26-28页 |
| 第二章 棉纤维特异表达的GhManA2基因启动子的克隆和功能分析 | 第28-76页 |
| 1.试验材料 | 第29-35页 |
| ·宿主菌、质粒载体及BAC文库 | 第29页 |
| ·各种酶及生化试剂 | 第29页 |
| ·常用培养基配制 | 第29-30页 |
| ·常用溶液配制 | 第30页 |
| ·实验所需试剂及其配制: | 第30-33页 |
| ·实验中所用的引物: | 第33-35页 |
| 2.试验方法: | 第35-49页 |
| ·棉花基因组DNA提取 | 第35页 |
| ·棉花总RNA提取 | 第35-37页 |
| ·DNaseI消化 | 第37页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR法分析GhManA2基因表达谱 | 第38页 |
| ·实时荧光定量PCR法分析GhManA2基因表达谱 | 第38-39页 |
| ·基因表达差异的分析方法 | 第39-40页 |
| ·BAC文库筛选策略 | 第40-42页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒DNA | 第42-43页 |
| ·染色体步移 | 第43-44页 |
| ·序列的拼接、同源性搜索和顺式作用元件分析 | 第44-45页 |
| ·启动子缺失融合载体的构建 | 第45-47页 |
| ·基因枪介导的融合载体在胚珠中瞬时表达研究 | 第47-48页 |
| ·农杆菌工程菌株的获得 | 第48页 |
| ·农杆菌介导的胚珠瞬时表达 | 第48-49页 |
| 3.结果与分析 | 第49-71页 |
| ·GhManA2基因在棉纤维中的表达特点 | 第49-50页 |
| ·棉花BAC文库筛选 | 第50-52页 |
| ·通过染色体步移克隆GhManA2基因上游序列 | 第52-54页 |
| ·步移所得序列在单克隆G13中的验证及序列分析 | 第54-59页 |
| ·染色体步移结果在棉花基因组中的验证 | 第59页 |
| ·GhManA2基因启动子及基因组序列克隆与分析 | 第59-63页 |
| ·棉纤维特异表达基因GhManA2启动子功能验证 | 第63-71页 |
| 4.讨论 | 第71-76页 |
| ·棉纤维特异表达启动子研究的意义 | 第71页 |
| ·本研究主要发现及优缺点 | 第71-72页 |
| ·基因表达元件的功能验证 | 第72-73页 |
| ·试验操作过程中的一些具体问题 | 第73-76页 |
| 全文结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-124页 |
| 附录一 | 第84-86页 |
| 附录二 | 第86-92页 |
| 附录三 | 第92-103页 |
| 附录四 | 第103-118页 |
| 附录五 | 第118-124页 |
| 致谢 | 第124页 |