| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-18页 |
| ·研究的目的与意义 | 第10-12页 |
| ·蜱的免疫学防制的国内外研究进展 | 第12-17页 |
| ·功能抗原 | 第12-13页 |
| ·疫苗的研制与应用 | 第13-17页 |
| ·研究的内容和方法 | 第17-18页 |
| 第二章 青海血蜱幼蜱cDNA表达文库的构建 | 第18-35页 |
| ·材料与方法 | 第18-29页 |
| ·青海血蜱幼蜱 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·青海血蜱幼蜱总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·青海血蜱幼蜱的研磨 | 第19页 |
| ·水相分离 | 第19页 |
| ·沉淀RNA | 第19页 |
| ·洗涤RNA | 第19-20页 |
| ·重溶RNA | 第20页 |
| ·检测RM | 第20页 |
| ·青海血蜱幼蜱mRNA的纯化 | 第20-21页 |
| ·层析柱的准备 | 第20-21页 |
| ·层析柱层析RNA纯化mRNA | 第21页 |
| ·mRNA的检测 | 第21页 |
| ·青海血蜱幼蜱cDNA表达文库的构建 | 第21-29页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第22-23页 |
| ·合成cDNA第二链 | 第23页 |
| ·用T4 DNA聚合酶补平cDNA的末端 | 第23-24页 |
| ·在cDNA平末端加定向接头EcoR I/ Hind III | 第24页 |
| ·酶切消化定向接头EcoR I/ Hind III | 第24-25页 |
| ·分级分离大片段cDNA | 第25页 |
| ·将cDNA插入λSCREEN~(TM)载体 | 第25-26页 |
| ·重组基因的体外包装 | 第26-27页 |
| ·测定初级文库库容 | 第27-28页 |
| ·扩增噬菌体文库 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-31页 |
| ·RNA和mRNA | 第29-30页 |
| ·双链cDNA检测结果 | 第30页 |
| ·柱层析分级分离大片断cDNA结果 | 第30页 |
| ·文库库容测定结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-35页 |
| 第三章 文库的免疫学筛选和基因的克隆 | 第35-46页 |
| ·材料和方法 | 第35-41页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·试剂与实验用品 | 第35页 |
| ·仪器与设备 | 第35-36页 |
| ·阳性血清的制备 | 第36-37页 |
| ·蜱的培养及抗原的制备 | 第36页 |
| ·免疫家兔制备阳性血清 | 第36页 |
| ·阳性血清的预吸附 | 第36-37页 |
| ·cDNA文库的免疫学筛选 | 第37-38页 |
| ·培养宿主菌 | 第37页 |
| ·倒平板准备噬菌斑 | 第37-38页 |
| ·免疫学筛选 | 第38页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第38-41页 |
| ·JM109感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·cre重组酶介导的质粒切除自动亚克隆 | 第39页 |
| ·亚克隆质粒的提取 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的转化 | 第40页 |
| ·菌液的PCR扩增鉴定 | 第40-41页 |
| ·测序 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的筛选结果 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的测序结果 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-46页 |
| 第四章 阳性克隆原核表达及反应原性的初步鉴定 | 第46-57页 |
| ·材料和方法 | 第46-52页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·λSCREEN空白环形载体的制备 | 第46-47页 |
| ·λSCREEN空白环形载体臂的体外包装 | 第46-47页 |
| ·λSCREEN噬菌体的自动亚克隆 | 第47页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·BL21(DE3)pLysE感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·重组质粒的转化 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的原核表达 | 第48页 |
| ·表达产物的蛋白质电泳以及目的蛋白的检测 | 第48-52页 |
| ·主要溶液配制 | 第48-50页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第50-52页 |
| ·免疫印迹 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-54页 |
| ·重组质粒表达的蛋白质电泳结果 | 第52-53页 |
| ·免疫印迹结果 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 第五章 全文结论 | 第57-58页 |
| ·构建了高质量的cDNA表达文库 | 第57页 |
| ·筛选到了11个基因 | 第57页 |
| ·表达了基因3个 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-76页 |
| 附录1 获取的序列号 | 第65-67页 |
| 附录2 基因HqL07的提交结果 | 第67-69页 |
| 附录3 基因HqL08的提交结果 | 第69-71页 |
| 附录4 基因HqL09的提交结果 | 第71-74页 |
| 附录5 基因HqL11的提交结果 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |