| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| ·边缘无浆体病及其研究进展 | 第12-18页 |
| ·病原 | 第12-13页 |
| ·地理分布 | 第13页 |
| ·传播媒介 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·临床症状 | 第14页 |
| ·病理变化 | 第14页 |
| ·诊断方法 | 第14-17页 |
| ·预防和治疗 | 第17-18页 |
| ·牛附红细胞体病及其研究进展 | 第18-25页 |
| ·附红细胞体的起源 | 第18-19页 |
| ·病原学研究 | 第19-21页 |
| ·附红细胞体的流行病学 | 第21-22页 |
| ·临床症状 | 第22页 |
| ·诊断方法 | 第22-24页 |
| ·免疫和预防 | 第24-25页 |
| 第二章 边缘无浆体病ELISA诊断方法的建立 | 第25-46页 |
| ·目的和意义 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌种与质粒 | 第25-26页 |
| ·主要培养基 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·酶及试剂盒 | 第27页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第28页 |
| ·Western-blot相关溶液 | 第28页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第28-29页 |
| ·边缘无浆体虫体 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·边缘无浆体基因组的提取 | 第29页 |
| ·MSP5部分基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·质粒的小量制备 | 第31页 |
| ·质粒的大量制备 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组表达质粒pGEX-KG的构建 | 第32页 |
| ·MSP5蛋白的表达与纯化 | 第32-34页 |
| ·ELISA试验条件的确定 | 第34-35页 |
| ·ELISA方法的临床应用 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-43页 |
| ·边缘无浆体MSP5部分基因的PCR扩增 | 第35页 |
| ·MSP5部分基因与PMD18-T载体的连接及鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒在E.coliBL21中的表达 | 第37页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达和可溶性分析 | 第37-38页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达条件的确定 | 第38-39页 |
| ·Western-blot分析 | 第39-40页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第40-42页 |
| ·ELISA方法的临床应用 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| ·边缘无浆体MSP5部分基因的原核表达及ELISA方法的建立 | 第43页 |
| ·临床样品的检测 | 第43-44页 |
| ·实验中出现的问题 | 第44页 |
| ·检测方法的比较 | 第44-46页 |
| 第三章 温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立 | 第46-58页 |
| ·研究目的和意义 | 第46页 |
| ·材料和方法 | 第46-50页 |
| ·阳性质粒及对照病原 | 第46-47页 |
| ·试剂和仪器 | 第47页 |
| ·主要试剂与溶液的配制 | 第47-48页 |
| ·血样的来源 | 第48页 |
| ·姬姆萨染色方法 | 第48页 |
| ·PCR诊断方法 | 第48-50页 |
| ·结果 | 第50-56页 |
| ·姬姆萨染色显微镜检查温氏附红细胞体 | 第50-51页 |
| ·PCR检测方法结果 | 第51-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·PCR方法对温氏附红细胞体病的诊断 | 第56页 |
| ·对 PCR方法的建立 | 第56页 |
| ·湖北省、江苏省温氏附红细胞体的流行病学调查 | 第56-57页 |
| ·PCR方法与姬姆萨镜检检查方法的比较 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68页 |