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鸭圆环病毒ORF3基因的序列分析及基因表达

摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-29页
   ·鸡贫血病毒(Chicken Infection Anaemia Virus,CIAV)第13-18页
     ·CIAV 的发现、命名及分布情况第13-14页
     ·CIAV 的形态学及理化特性第14-15页
     ·病毒基因组及编码蛋白第15页
     ·CIAV 组织病理学第15-16页
     ·诊断方法第16-17页
       ·临床症状第16页
       ·依据病理剖检变化进行诊断第16页
       ·病原学诊断第16页
       ·血清学诊断第16-17页
       ·分子生物学诊断第17页
     ·CIAV 的预防和防制第17-18页
   ·猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)第18-25页
     ·病原学第18-19页
       ·病毒分类与形态第18页
       ·病毒理化特性第18-19页
     ·分子生物学特征第19-20页
       ·病毒基因组结构第19页
       ·病毒编码的蛋白第19-20页
     ·流行病学第20-21页
     ·PCV 致病机理第21-22页
       ·PCV2 的组织嗜性和靶细胞第21页
       ·PCV2 的致病机制第21-22页
       ·PCV2 感染后的特异性抗体变化第22页
       ·PCV2 发生的诱导因素第22页
     ·诊断方法第22-24页
       ·病原学方法第22-23页
       ·血清学方法第23-24页
     ·PCV 的的预防控制第24-25页
   ·鸭圆环病毒(Duck Circovirus, DuCV)第25-29页
     ·DuCV 的病原学第25页
     ·鸭圆环病毒的基因组第25-27页
     ·鸭圆环病毒的基因组第27页
     ·鸭圆环病毒的流行病学第27页
     ·鸭圆环病毒的致病机理第27-28页
     ·鸭圆环病毒的诊断第28-29页
2 材料与方法第29-55页
   ·鸭圆环病毒ORF3 基因克隆测序及序列分析第29-36页
     ·材料第29-30页
       ·病料、菌种和克隆载体第29页
       ·主要试剂第29页
       ·主要仪器第29-30页
     ·试验方法第30-36页
       ·病毒基因组DNA 的提取第30页
       ·鸭圆环病毒(DuCV)ORF3 基因 PCR 扩增第30-31页
       ·电泳检测第31页
       ·目的核苷酸克隆测序第31-34页
       ·鸭圆环病毒(DuCV)ORF3 基因序列分析第34-36页
   ·鸭圆环病毒 FJ0601 株 ORF3 蛋白的原核表达及功能验证第36-44页
     ·材料第36-37页
       ·载体与受体菌第36页
       ·仪器与试剂第36-37页
       ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂第37页
     ·试验方法第37-44页
       ·引物设计与合成第37-38页
       ·鸭圆环病毒(DuCV)ORF3 基因原核表达载体的构建第38-41页
       ·pET-32a-C3 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第41-44页
   ·鸭圆环病毒ORF3 基因的真核表达第44-55页
     ·材料第44-46页
       ·质粒、细胞、受体菌及细胞培养基第44-45页
       ·主要试剂第45页
       ·培养基及主要试剂的配制方法第45-46页
       ·主要仪器及设备第46页
     ·试验方法第46-55页
       ·引物设计及合成第47页
       ·DuCV ORF3 基因重组杆状病毒转移载体的构建第47-50页
       ·重组质粒的转座(即重组Bacmid 的构建)第50-51页
       ·重组Bacmid DNA 的提取及鉴定第51-52页
       ·重组杆状病毒的获得与病毒扩增第52-53页
       ·ORF3 蛋白在sf9 昆虫细胞中的表达与检测第53-55页
3 结果与分析第55-66页
   ·克隆测序结果分析第55-60页
     ·PCR 扩增及序列分析第55页
     ·克隆与酶切鉴定第55-56页
     ·ORF3 基因同源性分析和进化树的构建第56-60页
   ·原核表达及抗血清制备第60-62页
     ·DuCV ORF-C3 基因的 PCR 扩增结果第60页
     ·pET-32a-ORF3 重组质粒的筛选和酶切鉴定第60-61页
     ·重组菌菌体裂解物的凝胶电泳结果第61-62页
     ·原核表达 DuCV ORF3 蛋白的 Western-blotting 检测第62页
     ·制备抗DuCV ORF3 蛋白的抗血清第62页
   ·Ⅱ型DuCV-ORF3 基因的真核表达第62-66页
     ·DuCV ORF3 基因的 PCR 扩增结果第62-63页
     ·pFastBac HTA-C3 重组质粒的筛选和酶切鉴定第63页
     ·重组Bacmid DNA 的鉴定第63-64页
     ·真核表达基因2 型DuCV ORF3 蛋白的Western-blotting 检测结果第64页
     ·IFA 鉴定结果第64-66页
4 讨论第66-70页
5 结论第70-71页
参考文献第71-79页
致谢第79-80页
硕士学位论文内容简介及自评第80页

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