| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 1前言 | 第14-24页 |
| ·海水养殖及其细菌性病害 | 第14-15页 |
| ·病原弧菌的致病机理 | 第15-19页 |
| ·粘附相关因子 | 第15-17页 |
| ·铁离子利用 | 第17-19页 |
| ·荚膜 | 第19页 |
| ·内毒素 | 第19-20页 |
| ·胞外产物 | 第20-23页 |
| ·胞外蛋白酶 | 第20页 |
| ·溶血素 | 第20-21页 |
| ·细胞溶素 | 第21页 |
| ·肠毒素 | 第21-22页 |
| ·不耐热性肠毒素 | 第22页 |
| ·耐热性肠毒素 | 第22页 |
| ·封闭带毒素 | 第22页 |
| ·副霍乱毒素 | 第22-23页 |
| ·研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-44页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·转化菌株和质粒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-27页 |
| ·生物试剂 | 第24页 |
| ·培养基配制 | 第24页 |
| ·化学试剂 | 第24-27页 |
| ·方法 | 第27-44页 |
| ·灿烂弧菌的鉴定及致病性检测 | 第27-28页 |
| ·生理生化试验 | 第27页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第27-28页 |
| ·溶血性和磷脂酶活性试验及人工感染实验(LD50) | 第28页 |
| ·灿烂弧菌外毒素的提纯 | 第28-31页 |
| ·灿烂弧菌QD-1 | 第28页 |
| ·灿烂弧菌QD-1 菌株外毒素的提取准备 | 第28-29页 |
| ·葡聚糖交换层析柱的装柱 | 第29页 |
| ·细菌外毒素的提取 | 第29-30页 |
| ·外毒素蛋白浓度测定 | 第30-31页 |
| ·外毒素的LD50 测定 | 第31页 |
| ·溶血素基因的PCR 扩增 | 第31-36页 |
| ·PCR 模板DNA 的制备 | 第31页 |
| ·溶血素基因的扩增 | 第31页 |
| ·目的条带的回收 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·连接T 载体进行测序 | 第32页 |
| ·测序目的片段的处理 | 第32-33页 |
| ·PGEX-6P-I 载体的处理 | 第33-34页 |
| ·目的片段和载体PGEX-6P-I 的连接 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第34-35页 |
| ·测序鉴定正确的阳性表达质粒转化至E.coli BL21（DE3） | 第35-36页 |
| ·4HPPD 基因表达 | 第36-39页 |
| ·诱导物浓度选择 | 第36页 |
| ·重组表达蛋白的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的提取、纯化 | 第37-39页 |
| ·Western-Blot 免疫印迹 | 第39-40页 |
| ·考马斯亮蓝法测定纯化蛋白的浓度 | 第40页 |
| ·重组蛋白生物活性测定 | 第40页 |
| ·制备小鼠抗4HPPD 蛋白抗血清 | 第40-41页 |
| ·检测三免后血清抗体效价 | 第41-43页 |
| ·间接ELISA 方法的基本操作程序 | 第41-42页 |
| ·抗原最佳包被浓度以及血清最佳稀释度的选择 | 第42页 |
| ·二抗稀释度的选择 | 第42页 |
| ·显色时间的选择 | 第42-43页 |
| ·纯化外毒素与免疫小鼠血清的ELISA 检测 | 第43页 |
| ·抗原最佳包被浓度以及血清最佳稀释度的选择 | 第43页 |
| ·QD-1 菌株纯化外毒素免疫小鼠产生抗体与纯化的重组蛋白 Western-Blot 检测 | 第43页 |
| ·溶血素中和试验 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-58页 |
| ·灿烂弧菌的鉴定及致病性检测 | 第44-49页 |
| ·生化试验 | 第44页 |
| ·扩增结果 | 第44-48页 |
| ·溶血性和磷脂酶活性试验及人工感染实验的结果 | 第48-49页 |
| ·羊血平板 | 第48页 |
| ·磷脂酶活性测定 | 第48-49页 |
| ·人工感染实验及灿烂弧菌的半数致死量 | 第49页 |
| ·灿烂弧菌外毒素的提纯 | 第49-50页 |
| ·最佳硫酸铵饱和度的选择 | 第49-50页 |
| ·细菌外毒素的提取 | 第50页 |
| ·外毒素蛋白浓度测定 | 第50页 |
| ·外毒素的LD50 测定 | 第50-51页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第51-54页 |
| ·溶血素基因的PCR 扩增 | 第51-53页 |
| ·PGEX-6P-I 载体的处理 | 第53页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第53-54页 |
| ·蛋白表达 | 第54-55页 |
| ·条件的优化结果 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的复性及纯化 | 第55页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第55页 |
| ·Western-Blot 免疫印迹 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白生物活性测定: | 第56页 |
| ·检测三免后血清抗体效价 | 第56页 |
| ·间接 ELISA 试验条件的优化 | 第56页 |
| ·纯化外毒素与免疫小鼠血清的 ELISA 检测 | 第56页 |
| ·QD-1 菌株与纯化的重组蛋白 Western-Blot 检测结果 | 第56-57页 |
| ·溶血素中和试验 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 研究生期间发表论文 | 第76-77页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第77页 |
