| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词 | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| ·胰岛素样生长因子-1概述 | 第10-17页 |
| ·IGF-1的理化性质 | 第10-11页 |
| ·IGF-1的基因及蛋白质结构 | 第11-12页 |
| ·IGF-1的生物学功能 | 第12-14页 |
| ·胰岛素样生长因子系统(IGFs)概述 | 第14-16页 |
| ·rhIGF-1的克隆表达 | 第16-17页 |
| ·蛋白质融合表达概述 | 第17-18页 |
| ·包涵体概述 | 第18-20页 |
| ·包涵体的定义、组成与特性 | 第18页 |
| ·包涵体的形成 | 第18-19页 |
| ·减少包涵体形成的策略 | 第19-20页 |
| ·包涵体的复性 | 第20-24页 |
| ·蛋白质的折叠机理 | 第21页 |
| ·包涵体蛋白复性方法 | 第21-22页 |
| ·影响复性效率的环境因素 | 第22-24页 |
| ·复性效果的检测方法 | 第24页 |
| ·本研究的目的与内容 | 第24-28页 |
| ·本研究的意义 | 第24-25页 |
| ·研究思路 | 第25-27页 |
| ·主要研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第28-35页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·实验试剂 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·碱法小提质粒 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE电泳试剂和凝胶配方(小分子胶) | 第32-33页 |
| ·包涵体制备及清洗 | 第33页 |
| ·Ni~(2+)亲和层析纯化包涵体 | 第33页 |
| ·rhIGF-1融合蛋白的切割 | 第33页 |
| ·Western Blot | 第33-34页 |
| ·变性rhIGF-1复性 | 第34页 |
| ·荧光扫描 | 第34页 |
| ·凝胶柱HPLC | 第34页 |
| ·表达产物的生物活性测定(MTT法) | 第34-35页 |
| 第三章 大肠杆菌BL21(+)发酵条件的优化 | 第35-44页 |
| ·温度对基因工程菌生长及融合蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| ·温度对重组工程菌BL21(+)生长的影响 | 第35-36页 |
| ·温度对rhIGF-1融合蛋白表达的影响 | 第36页 |
| ·接种量对菌体生长及融合蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| ·接种量对菌体生长的影响 | 第36-37页 |
| ·接种量对融合蛋白表达的影响 | 第37页 |
| ·IPTG对菌体生长及融合蛋白表达的影响 | 第37-40页 |
| ·不同IPTG浓度对菌体生长及融合蛋白表达的影响 | 第38页 |
| ·IPTG添加时间对菌体生长及融合蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| ·诱导表达时间与rhIGF-1融合蛋白表达 | 第39-40页 |
| ·3L发酵罐发酵rhIGF-1融合蛋白 | 第40-41页 |
| ·本部分小结与讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 rhIGF-1融合蛋白的纯化与切割条件优化 | 第44-54页 |
| ·rhIGF-1融合蛋白包涵体的纯化 | 第44-45页 |
| ·rhIGF-1包涵体的清洗 | 第44-45页 |
| ·包涵体的Ni~(2+)离子亲和纯化 | 第45页 |
| ·羟胺切割融合蛋白的条件优化 | 第45-49页 |
| ·温度对羟胺切割效率的影响 | 第46-47页 |
| ·蛋白浓度对羟胺切割效率的影响 | 第47页 |
| ·羟胺浓度对切割效率的影响 | 第47-48页 |
| ·pH对羟胺切割效率的影响 | 第48-49页 |
| ·rhIGF-1的纯化及Western blot检测 | 第49-50页 |
| ·本部分小结与讨论 | 第50-54页 |
| 第五章 rhIGF-1复性的探索 | 第54-67页 |
| ·rhIGF-1的纯化 | 第54页 |
| ·rhIGF-1的体外复性摸索 | 第54-62页 |
| ·rhIGF-1标准品的HPLC及MTT法细胞活性测定 | 第55页 |
| ·氧化还原对对包涵体复性效率的影响 | 第55-57页 |
| ·蛋白质浓度对包涵体复性效率的影响 | 第57-59页 |
| ·温度对包涵体复性效率的影响 | 第59-61页 |
| ·rhIGF-1折叠过程的荧光光度分析 | 第61-62页 |
| ·本部分小结及讨论 | 第62-67页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| 第六章 实验的创新与展望 | 第67-69页 |
| ·实验的创新 | 第67页 |
| ·展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
