第一章 前言 | 第1-15页 |
1. 基质金属蛋白酶(MMPs) | 第8-14页 |
·MMPs家族 | 第8页 |
·MMPs结构 | 第8-10页 |
·MMPs的激活 | 第10-11页 |
·MMPs底物 | 第11-12页 |
·MMPs的功能 | 第12-13页 |
·抑制MMPs | 第13-14页 |
2. 本论文的研究目的和策略 | 第14-15页 |
第二章 MT1-MMP诱导表达及包涵体的分离纯化 | 第15-35页 |
一. 前言 | 第15-21页 |
二. 实验材料 | 第21-28页 |
1. 材料 | 第21-25页 |
·耗材 | 第21页 |
·仪器 | 第21页 |
·试剂 | 第21-25页 |
2. 方法 | 第25-28页 |
·包涵体蛋白的表达,提取及洗涤 | 第25页 |
·包涵体蛋白的溶解及纯化 | 第25-26页 |
·透析复性 | 第26页 |
·凝胶过滤柱复性 | 第26页 |
·活性检测 | 第26页 |
·计算Km和Kcat/Km | 第26-27页 |
·计算活化能 | 第27页 |
·蛋白浓度的测量 | 第27-28页 |
三. 结果与讨论 | 第28-35页 |
第三章 MT1-MMP亲和小肽的筛选 | 第35-52页 |
一. 前言 | 第35-39页 |
二. 实验材料与方法 | 第39-46页 |
1. 实验材料 | 第39-41页 |
·材料 | 第39页 |
·仪器 | 第39页 |
·试剂 | 第39-41页 |
2. 方法 | 第41-46页 |
·肽的固相合成(手工) | 第41-42页 |
·铺板ER2738细胞的制备 | 第42页 |
·噬菌体滴度测定 | 第42页 |
·以合成的MT1-MMP特异性小肽为筛选靶筛选MT1-MMP的亲和短肽 | 第42-44页 |
·ELISA法检测筛选后获得的重组噬菌体克隆与MT1-MMP特异小肽的结合活性 | 第44-45页 |
·ELISA法测定筛选的噬菌体肽与MT1-MMP特异小肽之间的Kd | 第45页 |
·测序噬菌体单链DNA的提取 | 第45-46页 |
三. 结果与讨论 | 第46-52页 |
参考文献 | 第52-58页 |
中文摘要 | 第58-60页 |
ABSTRACT | 第60-62页 |
致谢 | 第62页 |