| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 棉花纤维的形成 | 第13-15页 |
| ·棉花纤维的发育过程 | 第13-14页 |
| ·纤维原始细胞的分化和突起 | 第14-15页 |
| 2 棉花的种类和基因型 | 第15页 |
| 3 棉花纤维突变体 | 第15-16页 |
| 4 模式植物拟南芥表皮毛发育的研究概况 | 第16-18页 |
| ·MYB-bHLH-WD40蛋白复合体调控表皮细胞分化的命运 | 第16-17页 |
| ·拟南芥中调控表皮毛发育的重要基因 | 第17-18页 |
| 5 植物中的转录因子基因 | 第18-23页 |
| ·MYB转录因子的结构特征 | 第19-21页 |
| ·棉纤维发育基因及转录因子的研究进展 | 第21-23页 |
| ·棉花中的MYB1到MYB6基因 | 第21-22页 |
| ·转录因子GhMYB109 | 第22页 |
| ·转录因子RDL1和GaMYB2(Fif1) | 第22页 |
| ·转录因子GhMYB7和GhMYB9 | 第22-23页 |
| 第二部分 研究报告 | 第23-83页 |
| 引言 | 第23页 |
| 1 实验材料 | 第23-30页 |
| ·植物材料 | 第23-24页 |
| ·菌种和质粒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·棉花MYB基因信息 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-41页 |
| ·棉花RNA的提取 | 第30-32页 |
| ·改进的热硼酸法(提取除叶片外的棉花各组织) | 第30-31页 |
| ·实验前准备 | 第30-31页 |
| ·实验步骤 | 第31页 |
| ·CTAB法提取总RNA(用于棉花叶片的总RNA提取) | 第31-32页 |
| ·RACE步骤 | 第32-33页 |
| ·差异显示PCR(DDRT-PCR) | 第33-35页 |
| ·差异显示PCR引物 | 第33页 |
| ·cDNA片段的扩增 | 第33-34页 |
| ·PAGE分析 | 第34-35页 |
| ·PAGE电泳的准备 | 第34页 |
| ·5%PAGE胶的制备 | 第34页 |
| ·预电泳 | 第34页 |
| ·上样 | 第34页 |
| ·银染 | 第34-35页 |
| ·差异片段的回收与再扩增 | 第35页 |
| ·差异片段的回收 | 第35页 |
| ·再扩增 | 第35页 |
| ·扩增产物的电泳,回收,克隆及测序 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR | 第36-37页 |
| ·DNA的消化 | 第36页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR | 第37页 |
| ·棉花基因组DNA的提取 | 第37-39页 |
| ·Southern杂交分析 | 第39-41页 |
| ·基因组DNA酶切反应体系 | 第39页 |
| ·试剂及其配制 | 第39页 |
| ·Southern印迹 | 第39-40页 |
| ·DIG标记探针 | 第40页 |
| ·杂交 | 第40-41页 |
| ·洗膜与显色 | 第41页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41页 |
| ·序列分析与进化树的构建 | 第41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-83页 |
| ·棉纤维突变体的ODPA胚珠mRNA差异显示(DDRT-PCR) | 第41-48页 |
| ·总RNA的完整性 | 第41-42页 |
| ·差异片段的获得 | 第42-43页 |
| ·差异片段的再扩增与测序 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR验证假阳性 | 第44页 |
| ·差异片段序列的延伸 | 第44-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·mRNA著异显示法(DDRT-PCR)的缺陷 | 第47-48页 |
| ·差异片段偏少的原因 | 第48页 |
| ·差异片段的分析 | 第48页 |
| ·三个转录因子基因的克隆与研究 | 第48-66页 |
| ·基因GhTF1的克隆和表达研究 | 第48-55页 |
| ·GhTF1全长基因的分离 | 第48-50页 |
| ·GhTF1氨基酸序列的分析 | 第50-51页 |
| ·棉花GhTF1与其它作物中同源基因的比较分析 | 第51-52页 |
| ·GhTF1的表达分析 | 第52-53页 |
| ·二倍体基因组中GhTF1序列变异分析和聚类结果 | 第53页 |
| ·GhTF1的Southern杂交分析 | 第53-54页 |
| ·GhTF1的正义植物表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·载体构建的思路 | 第54页 |
| ·载体构建的验证 | 第54-55页 |
| ·基因GhTF2的克隆和表达研究 | 第55-60页 |
| ·GhTF2全长基因的分离 | 第55-57页 |
| ·GhTF2氨基酸序列的分析结果 | 第57-58页 |
| ·棉花GhTF2与其它作物中同源基因的比较分析 | 第58-59页 |
| ·GhTF2的表达分析 | 第59页 |
| ·二倍体基因组中GhTF2序列变异分析和聚类结果 | 第59-60页 |
| ·基因GhTF3的克隆和表达研究 | 第60-64页 |
| ·GhTF3全长基因的分离 | 第60-61页 |
| ·GhTF3氨基酸序列的分析结果 | 第61-62页 |
| ·棉花GhTF3与其它作物中同源基因的比较分析 | 第62-63页 |
| ·GhTF3的表达分析 | 第63-64页 |
| ·二倍体基因组中GhTF3序列变异分析和聚类结果 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·棉花MYB类基因的结构、表达及染色体定位研究 | 第66-83页 |
| ·棉花中的MYB基因 | 第66-67页 |
| ·二倍体基因组中MYB基因全长的克隆和序列分析 | 第67-73页 |
| ·二倍体中MYB基因全长序列的获得 | 第67-68页 |
| ·MYB基因中内含子情况分析 | 第68页 |
| ·基因编码区序列差异分析 | 第68-73页 |
| ·A、D基因组序列变异频率的比较 | 第73页 |
| ·SNPs出现对氨基酸序列的影响 | 第73页 |
| ·基因非编码区的序列差异 | 第73页 |
| ·MYB基因表达水平的分析 | 第73-75页 |
| ·亚洲棉材料中MYB基因的时空表达分析 | 第73-74页 |
| ·无纤维突变体材料中MYB基因表达的检测 | 第74-75页 |
| ·Ghmyb25的反义植物表达载体构建 | 第75-76页 |
| ·载体构建的思路 | 第75页 |
| ·载体构建的验证 | 第75-76页 |
| ·MYB基因的染色体定位 | 第76-80页 |
| ·基因GhTF1的染色体定位 | 第76页 |
| ·基因GhMYB6的染色体定位 | 第76-77页 |
| ·基因Ghmyb36的染色体定位 | 第77页 |
| ·基因Ghmyb9的染色体定位 | 第77-80页 |
| ·讨论 | 第80-83页 |
| ·MYB转录因子中的R2R3结构域 | 第80页 |
| ·MYB基因的序列变异 | 第80页 |
| ·MYB基因的特异表达 | 第80-81页 |
| ·本实验中染色体定位方法的讨论 | 第81-82页 |
| ·MYB基因染色体定位的意义 | 第82-83页 |
| 全文结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
