| 第一章 绪论 | 第1-30页 |
| ·细胞色素P450的分类及一般特性 | 第12-21页 |
| ·细胞色素P450的命名及其分类 | 第12-14页 |
| ·细胞色素P450的进化 | 第14页 |
| ·细胞色素P450的结构特征 | 第14-16页 |
| ·细胞色素P450的光谱特征 | 第16-17页 |
| ·细胞色素P450的多样性 | 第17-21页 |
| ·细胞色素P450种类的多样性 | 第17-18页 |
| ·细胞色素P450分布、表达的多样性 | 第18-19页 |
| ·P450催化反应及功能的多样性 | 第19-21页 |
| ·植物次生物质对昆虫细胞色素P450诱导的研究 | 第21-25页 |
| ·植物次生物质对昆虫细胞色素P450诱导的一些特征 | 第22-24页 |
| ·诱导的时间和剂量效应 | 第22-23页 |
| ·诱导的特异性和重叠性 | 第23页 |
| ·诱导的适应性意义 | 第23-24页 |
| ·诱导机制 | 第24-25页 |
| ·细胞色素P450、植物次生物质与抗药性的关系 | 第25-28页 |
| ·细胞色素P450与抗药性 | 第25-26页 |
| ·P450介导的昆虫抗药性的分子基础 | 第26-27页 |
| ·植物次生物质诱导的P450与抗药性的关系 | 第27-28页 |
| ·本文研究意义 | 第28-30页 |
| 第二章 2-十三烷酮和槲皮素对棉铃虫P450s的诱导 | 第30-46页 |
| ·棉铃虫细胞色素P450s 0-脱甲基活性的测定 | 第30-36页 |
| ·材料与方法 | 第31-32页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·酶液制备 | 第31页 |
| ·细胞色素P450s 0-脱甲基活性测定 | 第31-32页 |
| ·气相色谱检测条件 | 第32页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第32页 |
| ·细胞色素P450s 0-脱甲基活性的计算 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·气相色谱法检测对硝基苯酚 | 第32-34页 |
| ·酶量和温度对细胞色素P450s 0-脱甲基活性的影响 | 第34-35页 |
| ·酶量对细胞色素P450s 0-脱甲基活性的影响 | 第34页 |
| ·温度对细胞色素P450s 0-脱甲基活性的影响 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素诱导对棉铃虫P450s 0-脱甲基活性的影响 | 第36-39页 |
| ·材料与方法 | 第36-37页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·试虫饲养与处理 | 第36页 |
| ·酶液制备 | 第36页 |
| ·细胞色素P450s 0-脱甲基活性测定 | 第36页 |
| ·气相色谱检测条件 | 第36页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第36-37页 |
| ·细胞色素P450s 0-脱甲基活性计算 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-38页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素对棉铃虫中肠细胞色素P450s 0-脱甲基活性的影响 | 第37页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素对棉铃虫脂肪体细胞色素P450s 0-脱甲基活性的影响 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·棉铃虫P450s活性诱导的时间和剂量效应 | 第39-43页 |
| ·材料与方法 | 第39-40页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·试虫饲养与处理 | 第39页 |
| ·酶液制备 | 第39页 |
| ·细胞色素P450s 0-脱甲基活性测定 | 第39页 |
| ·气相色谱检测条件 | 第39页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第39-40页 |
| ·细胞色素P450s 0-脱甲基活性计算 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-41页 |
| ·槲皮素对棉铃虫中肠和脂肪体P450s O-脱甲基活性诱导的时间和剂量效应 | 第40页 |
| ·2-十三烷酮对棉铃虫中肠和脂肪体P450s O-脱甲基活性诱导的时间和剂量效应 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素诱导对棉铃虫P450s含量的影响 | 第43-46页 |
| ·材料与方法 | 第43-44页 |
| ·供试昆虫及其处理 | 第43页 |
| ·化学试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·酶液制备 | 第43页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第43页 |
| ·细胞色素P450s含量的测定 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-45页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素诱导对棉铃虫脂肪体细胞色素P450s比含量的影响 | 第44页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素诱导对棉铃虫中肠细胞色素P450s比含量的影响 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 槲皮素对棉铃虫总RNA和mRNA的影响 | 第46-50页 |
| ·材料和方法 | 第46-48页 |
| ·供试虫源 | 第46页 |
| ·化学试剂 | 第46页 |
| ·总RNA的提取和纯化 | 第46-47页 |
| ·反转录 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-49页 |
| ·槲皮素对棉铃虫中肠和脂肪体总RNA比含量影响的时间效应 | 第48页 |
| ·槲皮素对棉铃虫中肠和脂肪体cDNA比含量影响的时间效应 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 棉铃虫P450基因的克隆 | 第50-78页 |
| ·棉铃虫P450基因5’端基因的克隆 | 第50-60页 |
| ·实验材料 | 第50-52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-60页 |
| ·棉铃虫P450基因3’端基因的克隆 | 第60-67页 |
| ·材料与方法 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-67页 |
| ·2-十三烷酮诱导的P450全长基因的克隆 | 第67-76页 |
| ·材料与方法 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 植物次生物质诱导对棉铃虫CYP6B6基因表达的影响 | 第78-87页 |
| ·材料和方法 | 第78-80页 |
| ·供试虫源 | 第78-79页 |
| ·化学试剂 | 第79页 |
| ·总RNA的提取和cDNA合成 | 第79页 |
| ·引物设计 | 第79-80页 |
| ·CYP6B6基因mRNA相对表达量的测定 | 第80页 |
| ·结果 | 第80-85页 |
| ·最适模板量的选择 | 第80-81页 |
| ·最适循环数的选择 | 第81-82页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素组合诱导对棉铃虫中肠CYP6B6基因表达的影响 | 第82-83页 |
| ·2-十三烷酮和槲皮素组合诱导对棉铃虫脂肪体CYP6B6基因表达的影响 | 第83-84页 |
| ·单宁酸诱导对棉铃虫CYP6B6基因表达的影响 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因的外源表达 | 第87-98页 |
| ·材料 | 第87-89页 |
| ·菌种和质粒 | 第87页 |
| ·主要化学试剂 | 第87页 |
| ·引物设计 | 第87页 |
| ·部分储存液配方 | 第87-89页 |
| ·方法 | 第89-92页 |
| ·P450基因原核表达载体的构建 | 第89-90页 |
| ·重组表达质粒PGEXF／G的构建和双酶切鉴定 | 第90-91页 |
| ·质粒PGEX-4T-1双酶切以及回收 | 第90-91页 |
| ·PCR扩增F／G全长，使其带上BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点 | 第91页 |
| ·目的基因和表达载体的连接 | 第91页 |
| ·连接产物的转化、鉴定 | 第91页 |
| ·细胞培养和诱导表达 | 第91-92页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第92页 |
| ·细胞色素P450s含量测定 | 第92页 |
| ·蛋白的含量测定 | 第92页 |
| ·结果 | 第92-96页 |
| ·质粒PGEX-4T-1双酶切以及回收 | 第92-93页 |
| ·带BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的CYP6B6基因的扩增 | 第93-94页 |
| ·连接产物的转化、鉴定 | 第94页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分析 | 第94-95页 |
| ·细胞色素P450s的比含量测定 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| ·表达系统和表达载体的选择 | 第96页 |
| ·融合蛋白产量的提高 | 第96-97页 |
| ·表达的结果 | 第97页 |
| ·展望 | 第97-98页 |
| 第七章 总结 | 第98-101页 |
| ·总结 | 第98-99页 |
| ·本研究的创新之处 | 第99-100页 |
| ·问题和展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
