| 第一章 序言 | 第1-27页 |
| ·研究背景 | 第13-14页 |
| ·口蹄疫与口蹄疫病毒 | 第13页 |
| ·口蹄疫疫苗的研究概况 | 第13-14页 |
| ·转基因植物疫苗的原理和策略 | 第14-16页 |
| ·植物基因转化载体系统的构建 | 第14-15页 |
| ·转基因植物疫苗表达系统 | 第15-16页 |
| ·转基因可饲(食)疫苗的免疫机理 | 第16-17页 |
| ·转基因疫苗国内外研究现状 | 第17-20页 |
| ·大肠杆菌热敏肠毒素B亚单位(LT-B)在植物中的表达 | 第17-18页 |
| ·乙肝表面抗原(HBsAg)在植物中的表达 | 第18页 |
| ·诺沃克病毒衣壳蛋白(NVCP)在植物中的表达 | 第18-19页 |
| ·猪传染性胃肠炎病毒S糖蛋白(TGEV-S)在植物中的表达 | 第19页 |
| ·口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1在植物中的表达 | 第19-20页 |
| ·狂犬病病毒糖蛋白(G蛋白)在植物中的表达 | 第20页 |
| ·转基因疫苗存在的问题及未来研究的展望 | 第20-23页 |
| ·外源基因在植物中表达量低 | 第20-22页 |
| ·如何建立高频再生的遗传转化受体系统是制约研究者开发有应用前景的可饲疫苗的“瓶颈” | 第22-23页 |
| ·转基因植物疫苗的免疫原性问题 | 第23页 |
| ·转基因疫苗可能引起免疫耐受 | 第23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-27页 |
| 第二章 口蹄疫病毒O／China／99株植物双元表达载体的构建 | 第27-43页 |
| ·材料和方法 | 第27-35页 |
| ·质粒和菌株 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·FMDV VP1基因植物双元表达载体pBin438／VP1的构建 | 第28-31页 |
| ·FMDV多基因植物双元表达载体pBin438／P12X3C的构建 | 第31-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-36页 |
| ·植物表达Mini-Ti质粒pBin438／VP1的构建及序列分析 | 第35页 |
| ·FMDV VP1基因植物双元表达载体的构建 | 第35页 |
| ·植物表达Mini-Ti质粒pBin438／P12X3C的构建及序列分析 | 第35-36页 |
| ·FMDV多基因植物双元表达载体的构建 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-43页 |
| 第三章 口蹄疫病毒免疫原基因在番茄中的转化 | 第43-56页 |
| ·材料和方法 | 第43-45页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·转化载体 | 第43页 |
| ·试剂的配制 | 第43-44页 |
| ·种子的准备和消毒方法的确定 | 第44页 |
| ·番茄的再生 | 第44页 |
| ·不同植物激素浓度对番茄子叶再生的影响 | 第44页 |
| ·Kan梯度预实验 | 第44-45页 |
| ·番茄子叶的遗传转化 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-50页 |
| ·种子消毒方法的确定 | 第45-46页 |
| ·番茄的转化与再生系统 | 第46-49页 |
| ·转基因番茄卡那霉素抗性植株的获得 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-56页 |
| ·植物细胞的全能性与高效再生转化系统的建立 | 第50页 |
| ·培养基中不同激素配比对愈伤组织诱导及不定芽分化的影响 | 第50-51页 |
| ·转化细胞的选择 | 第51页 |
| ·预培养对转化率的影响 | 第51-56页 |
| 第四章 口蹄疫病毒免疫原基因在番茄中的整合与表达 | 第56-65页 |
| ·材料与方法 | 第56-59页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第56页 |
| ·PCR法检测外源基因的整合 | 第56-57页 |
| ·转基因番茄的RT-PCR检测 | 第57-58页 |
| ·转基因番茄表达蛋白的双抗夹心ELISA检测 | 第58页 |
| ·转基因番茄表达蛋白的Western-blotting检测 | 第58-59页 |
| ·结果 | 第59-60页 |
| ·转基因番茄的PCR检测 | 第59页 |
| ·转基因番茄的RT-PCR检测 | 第59页 |
| ·目的基因在番茄中表达蛋白的ELISA检测 | 第59页 |
| ·目的基因表达蛋白的Western-blotting检测 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-65页 |
| ·外源基因在植物中的整合 | 第60页 |
| ·外源基因在转基因植物中表达 | 第60-61页 |
| ·外源基因在植物中表达存在的问题 | 第61-62页 |
| ·未来研究的方向 | 第62-65页 |
| 第五章 口蹄疫病毒VP1基因在转基因拟南芥种子中的表达及活性检测 | 第65-73页 |
| ·材料与方法 | 第65-67页 |
| ·质粒和菌株 | 第65-66页 |
| ·试剂及植物材料 | 第66页 |
| ·引物的设计与合成 | 第66页 |
| ·种子特异性表达Mini-Ti质粒p7SBin438／VP1的构建 | 第66页 |
| ·FMDV种子特异性双元表达载体的构建 | 第66页 |
| ·浸花法(Floral dip)转化拟南芥 | 第66-67页 |
| ·拟南芥TO代种子的抗性筛选 | 第67页 |
| ·转基因拟南芥的PCR检测 | 第67页 |
| ·转基因拟南芥Western-blotting检测 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-71页 |
| ·种子特异性表达Mini-Ti质粒p7SBin438／VP1的构建 | 第67-69页 |
| ·植物种子特异性双元表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·拟南芥种子的收获和抗性筛选 | 第70页 |
| ·转基因拟南芥的PCR检测 | 第70页 |
| ·转基因拟南芥的Western-blotting分析 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 转基因番茄的动物免疫试验 | 第73-81页 |
| ·材料和方法 | 第73-75页 |
| ·植物材料和实验动物 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73-74页 |
| ·疫苗的制备及免疫剂量 | 第74页 |
| ·实验动物免疫 | 第74页 |
| ·抗体的监测 | 第74页 |
| ·攻毒试验 | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-78页 |
| ·豚鼠体内FMDV特异性抗体的动态变化 | 第75页 |
| ·转基因疫苗免疫豚鼠的抗体滴度 | 第75-76页 |
| ·攻毒试验 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·转基因疫苗的应用前景及未来研究的方向 | 第79-81页 |
| 第七章 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 附录 | 第92-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简历 | 第104页 |
