| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-37页 |
| ·马铃薯的经济价值及其种植 | 第13-14页 |
| ·马铃薯病毒与马铃薯病毒性病害 | 第14-15页 |
| ·马铃薯主要病毒及其危害简介 | 第15-19页 |
| ·马铃薯Y病毒 | 第15-16页 |
| ·马铃薯卷叶病毒 | 第16页 |
| ·马铃薯X病毒 | 第16-17页 |
| ·马铃薯S病毒 | 第17页 |
| ·马铃薯M病毒 | 第17-18页 |
| ·马铃薯A病毒 | 第18页 |
| ·马铃薯Y病毒坏死株系块茎坏死种 | 第18-19页 |
| ·烟草脆裂病毒 | 第19页 |
| ·马铃薯帚顶病毒 | 第19页 |
| ·马铃薯纺锤块茎类病毒 | 第19页 |
| ·马铃薯病毒的检测方法及其原理 | 第19-33页 |
| ·生物学实验方法 | 第20-22页 |
| ·生物学实验方法的原理和特点 | 第20-21页 |
| ·检测马铃薯病毒常用的指示植物 | 第21-22页 |
| ·电镜技术方法 | 第22-23页 |
| ·电镜技术方法的原理 | 第22-23页 |
| ·电镜技术常用的方法 | 第23页 |
| ·叶浸蘸法 | 第23页 |
| ·负染制片法 | 第23页 |
| ·超薄切片法 | 第23页 |
| ·以抗体为基础的免疫学检测方法 | 第23-27页 |
| ·酶联免疫吸附法 | 第24-25页 |
| ·基本原理 | 第24页 |
| ·双抗体夹心-酶联免疫吸附法 | 第24-25页 |
| ·硝酸纤维素膜-酶联免疫吸附法 | 第25页 |
| ·快速酶联免疫吸附法 | 第25页 |
| ·其他以抗体为基础的免疫学方法 | 第25-27页 |
| ·直接组织斑点免疫测定 | 第26页 |
| ·免疫电镜技术(Immunoelectron microscopy，IEM) | 第26页 |
| ·流式细胞仪法 | 第26页 |
| ·IgG指示试纸法 | 第26-27页 |
| ·马铃薯病毒核酸分子检测技术 | 第27-33页 |
| ·RT-PCR检测技术 | 第27-29页 |
| ·常规RT-PCR检测技术 | 第27-28页 |
| ·多元-RT-PCR检测技术 | 第28页 |
| ·荧光竞争—RT-PCR检测技术 | 第28-29页 |
| ·免疫捕捉—RT-PCR检测技术 | 第29页 |
| ·指示分子—核酸序列扩增检测技术 | 第29-31页 |
| ·核酸分子杂交检测技术 | 第31-33页 |
| ·核酸斑点杂交技术 | 第32-33页 |
| ·PCR微量板杂交检测技术 | 第33页 |
| ·血清学方法与分子生物学技术方法的比较 | 第33-35页 |
| ·对检测样品的要求 | 第33-34页 |
| ·敏感性和特异性 | 第34-35页 |
| ·病毒定量检测 | 第35页 |
| ·病毒基因分型 | 第35页 |
| ·检测的可操作性 | 第35页 |
| ·检测成本 | 第35页 |
| ·讨论与预测 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-51页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·质粒 | 第37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·供试病毒 | 第37页 |
| ·试剂及酶类 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-51页 |
| ·样品的采集 | 第38页 |
| ·样品的检测 | 第38-40页 |
| ·PLRV的生物学鉴定 | 第38页 |
| ·DAS-ELISA检测 | 第38-39页 |
| ·快速酶联免疫吸附法检测 | 第39页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(PCR)法检测 | 第39-40页 |
| ·植物总RNA提取 | 第40页 |
| ·异硫氰酸胍法 | 第40页 |
| ·TRIzol法 | 第40页 |
| ·试剂盒法 | 第40页 |
| ·马铃薯卷叶病毒CP基因克隆载体和表达载体的构建 | 第40-45页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第40页 |
| ·RT-PCR扩增目的片段 | 第40页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第40-41页 |
| ·与pGEM-T easy载体连接 | 第41页 |
| ·PLRV CP基因克隆载体的构建 | 第41-43页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·转化 | 第41-42页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第42页 |
| ·克隆菌的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·重组克隆的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·DNA序列测定 | 第42-43页 |
| ·PLRV CP基因原核表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第43页 |
| ·酶切并回收目的片断 | 第43-44页 |
| ·与原核表达载体pGEX2T连接 | 第44页 |
| ·转化 | 第44页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第44-45页 |
| ·酶切鉴定 | 第45页 |
| ·DNA序列测定 | 第45页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及检测 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| ·融合蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第46页 |
| ·马铃薯病毒分子生物学检测方法的建立 | 第46-50页 |
| ·RT-PCR检测技术的建立 | 第46页 |
| ·一步—RT-PCR检测技术 | 第46页 |
| ·核酸斑点杂交检测方法的建立 | 第46-50页 |
| ·常规核酸斑点杂交方法 | 第46-48页 |
| ·改进的核酸斑点杂交方法 | 第48-50页 |
| ·分子生物学检测方法的应用 | 第50-51页 |
| ·对河南怀山药的检测 | 第50页 |
| ·对龙岩山药组织培养苗的检测 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-66页 |
| ·样品的检测 | 第51页 |
| ·血清学检测 | 第51页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(PCR)法检测 | 第51页 |
| ·马铃薯卷叶病毒CP基因克隆载体的构建 | 第51-56页 |
| ·RT-PCR扩增后纯化回收目的片段 | 第51-52页 |
| ·克隆菌的酶切鉴定1％琼脂糖凝胶电泳检测 | 第52-53页 |
| ·重组克隆菌的PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·克隆菌的DNA序列测定 | 第54页 |
| ·PLRV CP基因序列测定及同源性比较 | 第54页 |
| ·PLRV不同分离物CP氨基酸序列差异性分析 | 第54-56页 |
| ·马铃薯卷叶病毒CP基因克隆载体的构建 | 第56-58页 |
| ·重组克隆菌中目的片断的酶切鉴定 | 第57页 |
| ·重组克隆中目的片段的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| ·表达载体中目的片段的DNA序列测定 | 第58页 |
| ·融合蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第58页 |
| ·马铃薯病毒分子生物学检测方法的建立 | 第58-62页 |
| ·RT-PCR检测技术的建立 | 第58-59页 |
| ·RT-PCR检测方法对病毒样品的检测 | 第58-59页 |
| ·RT-PCR检测方法检测灵敏度的测定 | 第59页 |
| ·核酸斑点杂交检测方法的建立 | 第59-62页 |
| ·核酸斑点杂交检测方法对病毒样品的检测 | 第59页 |
| ·改进后的核酸斑点杂交检测方法对病毒样品的检测 | 第59-60页 |
| ·核酸斑点杂交检测方法检测灵敏度的测定 | 第60-61页 |
| ·改进后的核酸斑点杂交检测方法检测灵敏度的测定 | 第61-62页 |
| ·分子生物学检测方法的应用 | 第62-66页 |
| ·对河南怀山药的检测 | 第62页 |
| ·对龙岩山药组织培养苗的检测 | 第62-63页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR检测试剂盒的研制 | 第63-64页 |
| ·试剂组成 | 第63页 |
| ·使用本RT-PCR检测试剂盒的检测步骤 | 第63-64页 |
| ·马铃薯病毒核酸斑点杂交检测试剂盒的研制 | 第64-66页 |
| ·试剂盒的组成 | 第64页 |
| ·使用马铃薯病毒核酸斑点杂交检测试剂盒的检测步骤 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| ·马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白的表达 | 第66页 |
| ·RT-PCR方法与核酸斑点杂交方法灵敏度的比较 | 第66页 |
| ·核酸斑点杂交方法改进前后检测灵敏度的比较 | 第66页 |
| ·核酸斑点杂交方法检测不同核酸的检测灵敏度的比较 | 第66-67页 |
| 5 小结 | 第67-68页 |
| ·PLRV CP基因序列的测定 | 第67页 |
| ·检测技术的建立 | 第67页 |
| ·核酸斑点杂交方法的改进 | 第67页 |
| ·PLRV CP基因在大肠杆菌中表达条件的摸索 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录1 常见马铃薯病毒病在田间的症状表现及部分病毒粒子的形状 | 第77-82页 |
| 附录2 缩写词和英汉对照 | 第82-84页 |
| 附录3 本研究使用的主要试剂与溶液的配制 | 第84-90页 |
| 附录4 独创性声明 | 第90页 |