| 缩写 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一部分 蜈蚣草中砷超富集相关基因的克隆及其功能分析 | 第12-84页 |
| 1 引言 | 第12-31页 |
| 1． 1 砷的危害和砷污染概况 | 第12-13页 |
| 1． 2 土壤重金属污染的治理 | 第13-16页 |
| 1． 3 原核生物和酵母砷抗性研究进展 | 第16-19页 |
| 1． 4 蜈蚣草砷抗性研究进展 | 第19-22页 |
| 1． 5 ABC Transporter研究进展 | 第22-29页 |
| 1． 5． 1 ABC transporter的结构特征 | 第22-25页 |
| 1． 5． 2 植物的ABC基因家族 | 第25-29页 |
| 1． 6 本研究立题依据和技术路线 | 第29-31页 |
| 1． 6． 1 立题意义 | 第29-30页 |
| 1． 6． 2 技术路线 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-47页 |
| 2． 1 材料 | 第31-32页 |
| 2． 1． 1 植物材料 | 第31页 |
| 2． 1． 2 菌株 | 第31页 |
| 2． 1． 3 质粒载体 | 第31页 |
| 2． 1． 4 其它材料和试剂 | 第31-32页 |
| 2． 2 方法 | 第32-47页 |
| 2． 2． 1 RNA的提取： | 第32页 |
| 2． 2． 2 mRNA的纯化 | 第32-33页 |
| 2． 2． 3 mRNA的浓缩 | 第33页 |
| 2． 2． 4 SSH文库的构建 | 第33-41页 |
| 2． 2． 5 RACE法克隆PvABCT1基因全长 | 第41-42页 |
| 2． 2． 6 PvABCT1的序列分析 | 第42页 |
| 2． 2． 7 RT-PCR | 第42-44页 |
| 2． 2． 8 亚细胞定位(基因瞬时表达) | 第44-45页 |
| 2． 2． 9 酵母表达载体的构建 | 第45页 |
| 2． 2． 10 酵母转化 | 第45-46页 |
| 2． 2． 11 抗性转化子的筛选 | 第46-47页 |
| 2． 2． 12 在液体培养基中进行酵母砷的含量测定以及酵母抗性检测 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-75页 |
| 3． 1 蜈蚣草RNA的质量检测 | 第47-48页 |
| 3． 2 PvABCT1基因的分离 | 第48-61页 |
| 3． 2． 1 两个消减杂交(SSH)cDNA文库的构建 | 第48-50页 |
| 3． 2． 2 DNA测序及同源序列的检索与比较 | 第50-59页 |
| 3． 2． 3 蜈蚣草ABC transporter基因特异引物(GSPs)的设计 | 第59-60页 |
| 3． 2． 4 ABC transporter cDNA全长序列的获得 | 第60-61页 |
| 3． 3 PvABCT1基因的蛋白序列分析和结构分析 | 第61-67页 |
| 3． 3． 1 PvABCT1基因的同源性比较 | 第61-64页 |
| 3． 3． 2 PvABCT1基因保守结构域分析 | 第64-65页 |
| 3． 3． 3 PvABCT1基因系统树分析 | 第65-67页 |
| 3． 3． 4 PvABCT1基因的跨膜结构预测 | 第67页 |
| 3． 4 PvABCT1基因表达模式研究(RT-PCR) | 第67-68页 |
| 3． 5 PvABCT1基因的亚细胞定位 | 第68-70页 |
| 3． 5． 1 PvABCT1-GFP融合表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 3． 5． 2 洋葱表皮细胞的基因枪转化 | 第69-70页 |
| 3． 5． 3 转化细胞的激光共聚焦显微镜观察 | 第70页 |
| 3． 6 通过酵母功能互补实验分析PvABCT1基因的功能 | 第70-74页 |
| 3． 6． 1 PvABCT1酵母表达载体的构建 | 第70-72页 |
| 3． 6． 2 酵母FD236-6A的转化 | 第72-73页 |
| 3． 6． 3转化子的重金属抗性检验 | 第73-74页 |
| 3． 7 PvABCT1基因功能的进一步验证 | 第74-75页 |
| 3． 7． 1 液体培养基中酵母砷的抗性检测 | 第74-75页 |
| 3． 7． 2 酵母对砷的吸收量测定 | 第75页 |
| 4 讨论 | 第75-84页 |
| 4． 1 蜈蚣草RNA提取方法的改进 | 第75-77页 |
| 4． 1． 1 防止酚类化合物被氧化的对策 | 第75-76页 |
| 4． 1． 2 多糖及多酚的去除 | 第76-77页 |
| 4． 2 蜈蚣草中砷超富集相关的一种ABC Transporter基因的克隆 | 第77-78页 |
| 4． 3 蜈蚣草PvABCT1基因与砷的吸收转运有关 | 第78-79页 |
| 4． 4 PvABCT1基因砷吸收转运机制初探 | 第79-81页 |
| 4． 5 蜈蚣草砷解毒途径探讨 | 第81-84页 |
| 第二部分 钙离子和镧离子对生菜镉吸收量和植物络合素合酶基因表达量的影响 | 第84-112页 |
| 1 引言 | 第84-91页 |
| 1． 1 重金属污染概况 | 第84-85页 |
| 1． 2 植物络合素(Phytochelatins，PCs)研究进展 | 第85-87页 |
| 1． 3 钙离子和镧离子在植物对重金属耐受中的作用 | 第87-89页 |
| 1． 4 立题意义和技术路线 | 第89-91页 |
| 1． 4． 1 立题意义 | 第89-90页 |
| 1． 4． 2 技术路线 | 第90-91页 |
| 2 材料和方法 | 第91-97页 |
| 2． 1 材料 | 第91页 |
| 2． 1． 1 植物材料 | 第91页 |
| 2． 1． 2 菌株和质粒 | 第91页 |
| 2． 1． 3 主要生化试剂及酶类 | 第91页 |
| 2． 2 方法 | 第91-97页 |
| 2． 2． 1 种子萌发 | 第91-92页 |
| 2． 2． 2 植株培养与试验处理 | 第92页 |
| 2． 2． 3 植株中镉的测定 | 第92-93页 |
| 2． 2． 4 生菜总DNA的制备 | 第93页 |
| 2． 2． 5 生菜总RNA提取 | 第93-94页 |
| 2． 2． 6 RNA普通快速电泳 | 第94页 |
| 2． 2． 7 mRNA的纯化 | 第94页 |
| 2． 2． 8 LsPCS1片段的克隆 | 第94页 |
| 2． 2． 9 特异扩增片段的回收和克隆测序 | 第94页 |
| 2． 2． 10 LsPCS1基因全长的克隆 | 第94-96页 |
| 2． 2． 11 LsPCS1的序列分析 | 第96页 |
| 2． 2． 12 RT-PCR | 第96页 |
| 2． 2． 13 GSH和NPT的测定 | 第96-97页 |
| 3 结果与分析 | 第97-108页 |
| 3． 1 钙离子和镧离子对镉胁迫下生菜种子萌发和植株生长的影响 | 第97-99页 |
| 3． 2 钙离子和镧离子对镉胁迫下生菜植株中镉累积的影响 | 第99页 |
| 3． 3 LsPCS1基因的克隆 | 第99-103页 |
| 3． 3． 1 LsPCS1片段的克隆 | 第99-101页 |
| 3． 3． 2 LsPCS1基因全长序列的获得 | 第101-103页 |
| 3． 4 钙离子和镧离子对镉胁迫下的生菜植物络合素合酶基因表达的影响 | 第103-105页 |
| 3． 5 钙离子和镧离子对镉胁迫下的生菜植物络合素合成的影响 | 第105-108页 |
| 4 讨论 | 第108-112页 |
| 结论 | 第112-113页 |
| 展望 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-123页 |
| 在学期间发表的论文和申请的专利 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
