| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 研究背景、内容及意义 | 第11-12页 |
| 1.2 酒精对男性生殖系统的影响 | 第12-15页 |
| 1.2.1 男性睾酮的合成 | 第12-13页 |
| 1.2.2 酒精对下丘脑-垂体-性腺轴的影响 | 第13-14页 |
| 1.2.3 酒精对精子生成的影响 | 第14页 |
| 1.2.4 酒精对下丘脑—垂体—甲状腺轴的影响 | 第14页 |
| 1.2.5 酒精对前列腺和前列腺素的影响 | 第14-15页 |
| 1.2.6 酒精对激素的影响 | 第15页 |
| 1.3 睾丸间质细胞（Leydig cell，LC） | 第15-20页 |
| 1.3.1 Leydig细胞谱系的发育过程 | 第15-16页 |
| 1.3.2 不同发育阶段LC的分子标记 | 第16-18页 |
| 1.3.3 LC雄激素合成通路 | 第18-19页 |
| 1.3.4 细胞因子对睾丸功能的影响 | 第19-20页 |
| 1.4 酒精对MicroRNAs表达的调控及MicroRNAs调控激素的合成 | 第20-22页 |
| 1.4.1 酒精对MicroRNAs的影响 | 第20-21页 |
| 1.4.2 MicroRNAs对垂体合成激素的影响 | 第21页 |
| 1.4.3 MicroRNAs对LC合成雄激素的调控 | 第21-22页 |
| 1.5 miR-299a-5p的作用机制和对LC激素合成的影响 | 第22-23页 |
| 1.6 NFkB1的生物学功能 | 第23-25页 |
| 第二章 酒精抑制PLC雄激素的合成及其调控靶点 | 第25-50页 |
| 2.1.实验材料及设备 | 第25-29页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 实验用具 | 第26-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 原代PLC分离提取与纯度鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.2 原代PLC酒精处理 | 第31页 |
| 2.2.3 原代PLC中MiRNA瞬时转染 | 第31-32页 |
| 2.2.4 放射性免疫法检测孕酮含量 | 第32页 |
| 2.2.5 Small RNA提取 | 第32-35页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.2.7 Western-blot | 第36-39页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第39-49页 |
| 2.3.1 原代PLCs的分离及纯度鉴定（3β-HSD染色） | 第40页 |
| 2.3.2 同位素放射性酶联免疫法（RIA）检测酒精抑制PLCs合成雄激素 | 第40-41页 |
| 2.3.3 酒精对PLCs中雄激素合成酶表达的影响 | 第41页 |
| 2.3.4 酒精下调PLCs中miR-299a-5p的表达量 | 第41-42页 |
| 2.3.5 miR-299a-5p对不同发育阶段LC雄激素合成的调控分析 | 第42-45页 |
| 2.3.6 miR-299a-5p在不同发育阶段LCs中的表达情况 | 第45-46页 |
| 2.3.7 转录组学分析miR-299a-5p调控通路 | 第46-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 miR-299a-5p在LC中调控靶基因的鉴定 | 第50-71页 |
| 3.1 实验材料及设备 | 第50-51页 |
| 3.1.1 实验设备 | 第50页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-61页 |
| 3.2.1 双荧光素酶实验 | 第52页 |
| 3.2.2 过表达NFkB1抑制PLC雄激素合成 | 第52-59页 |
| 3.2.3 免疫共沉淀Co-immunoprecipitation (Co-IP) | 第59-61页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第61-70页 |
| 3.3.1 miR-299a-5p调控靶基因的分析及鉴定 | 第61-62页 |
| 3.3.2 双荧光素酶载体实验分析 | 第62页 |
| 3.3.3 过表达NFkB1对PLC雄激素合成通路中限速酶基因的影响 | 第62-64页 |
| 3.3.4 调控雄激素合成酶基因表达的转录因子预测 | 第64-66页 |
| 3.3.5 过表达miR-299a-5p inhibitor PLC中NFkB1结合的转录因子分析 | 第66-69页 |
| 3.3.6 注射miR-299a-5p抑制剂能引起睾丸间质炎症 | 第69-70页 |
| 3.3.7 酒精抑制PLC雄激素合成的分子机制 | 第70页 |
| 3.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 讨论 | 第71-74页 |
| 4.1 酒精抑制PLC雄激素的合成 | 第71页 |
| 4.2 miR-299a-5p靶向NFκB1调控LC雄激素合成酶及分化相关蛋白的信号途径 | 第71-72页 |
| 4.3 IL1、IL6调控PLC发育 | 第72页 |
| 4.4 StAR蛋白上调与NFκB1过表达有关 | 第72-74页 |
| 第五章 结论、创新点、展望 | 第74-76页 |
| 5.1 结论 | 第74页 |
| 5.2 创新点 | 第74页 |
| 5.3 展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
