| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 第一章 人肝脯氨肽酶基因的钓取及序列分析 | 第13-26页 |
| 1．1 实验材料 | 第13页 |
| 1．2 实验方法 | 第13-17页 |
| 1．3 实验结果 | 第17-25页 |
| 1．3．1 人肝Prolidase基因的克隆及鉴定 | 第17-19页 |
| 1．3．1．1 PCR扩增 | 第17-18页 |
| 1．3．1．2 基因克隆及鉴定 | 第18-19页 |
| 1．3．2 序列分析 | 第19-22页 |
| 1．3．3 核苷酸序列的同源性分析 | 第22-25页 |
| 1．4 讨论 | 第25页 |
| 参考文献 | 第25-26页 |
| 第二章 人肝脯氨肽酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第26-37页 |
| 2．1 实验材料 | 第26页 |
| 2．2 实验方法 | 第26-29页 |
| 2．3 实验结果 | 第29-34页 |
| 2．3．1 测定OD值波长的确定 | 第29-30页 |
| 2．3．2 E．coli之生长曲线 | 第30页 |
| 2．3．3 蓝白斑筛选重组质粒 | 第30-31页 |
| 2．3．4 PCR鉴定 | 第31页 |
| 2．3．5 重组表达质粒pGEX4T-1-P的构建 | 第31-32页 |
| 2．3．6 重组表达质粒pGEX4T-1-P的鉴定 | 第32页 |
| 2．3．7 重组质粒的转化 | 第32页 |
| 2．3．8 工程菌的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2．3．9 蛋白表达形式的确定 | 第33页 |
| 2．3．10 重组蛋白的变性-复性和酶活性测定 | 第33页 |
| 2．3．11 蛋白标准曲线 | 第33-34页 |
| 2．3．12 Proline标准曲线 | 第34页 |
| 2．3．13 梭曼标准曲线 | 第34页 |
| 2．4 讨论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-37页 |
| 第三章 人肝脯氨肽酶基因在酿酒酵母细胞中的表达 | 第37-49页 |
| 3．1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3．2 实验方法 | 第38-39页 |
| 3．3 实验结果 | 第39-46页 |
| 3．3．1 测定OD值波长的确定 | 第39-40页 |
| 3．3．2 S． cerevisiae之生长曲线 | 第40页 |
| 3．3．3 人肝Profidase酿酒酵母表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3．3．4 1．5kb和5．9kb回收纯化 | 第41-42页 |
| 3．3．5 重组表达质粒的PCR鉴定及酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3．3．6 载体质粒pYES2和重组质粒pYES2-P的电转化 | 第43页 |
| 3．2．7 酵母重组子表达条件正交试验优化 | 第43-44页 |
| 3．2．8 重组子的表达曲线 | 第44-45页 |
| 3．2．9 SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| 3．4 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 第四章 人肝脯氨肽酶基因在毕赤酵母细胞中的表达 | 第49-66页 |
| 4．1 实验材料 | 第49页 |
| 4．2 实验方法 | 第49-52页 |
| 4．3 实验结果 | 第52-63页 |
| 4．3．1 重组表达质粒pPIC9K-P的构建 | 第52页 |
| 4．3．2 PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 4．3．3 重组表达质粒pPIC9K-P的酶切鉴定 | 第53页 |
| 4．3．4 置换型同源重组毕赤酵母重组子的筛选与表达 | 第53-58页 |
| 4．3．5 插入型同源重组毕赤酵母重组子的筛选与表达 | 第58-63页 |
| 4．4 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-66页 |
| 第五章 rh-Prolidase的分离纯化及其生化药理性质研究 | 第66-78页 |
| 5．1 实验材料 | 第66页 |
| 5．2 实验方法 | 第66-67页 |
| 5．3 实验结果 | 第67-76页 |
| 5．3．1 毕赤酵母重组子P2# rh-Prolidase的分离纯化 | 第67-71页 |
| 5．3．2 酿酒酵母重组子w-3 rh-Prolidase的分离纯化 | 第71-73页 |
| 5．3．3 小鼠Soman中毒致死量的确定 | 第73页 |
| 5．3．4 rh-Prolidase体外抗毒实验 | 第73-74页 |
| 5．3．5 rh-Prolidase的稳定性 | 第74-76页 |
| 5．4 讨论 | 第76-78页 |
| 总结 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录一 主要仪器 | 第81-82页 |
| 附录二 缩略语索引 | 第82-83页 |
| 综述一 脯氨肽酶在军事医学方面的应用 | 第83-86页 |
| 综述二 脯氨肽酶的生化性质 | 第86-94页 |
| 综述三 脯氨肽酶缺陷症 | 第94-100页 |
| 综述四 脯氨肽酶在医学方面的应用 | 第100-104页 |
| 在站期间发表的论文 | 第104-105页 |
| 简历 | 第105页 |
