| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 序论 | 第13-34页 |
| ·双酶法制糖与耐高温α-淀粉酶 | 第13-14页 |
| ·淀粉液化工艺对α-淀粉酶性能改进的要求 | 第14-15页 |
| ·耐高温α-淀粉酶的改性 | 第15-20页 |
| ·耐高温α-淀粉酶产生菌的筛选 | 第20-23页 |
| ·嗜热古细菌α-淀粉酶 | 第20-21页 |
| ·古细菌α-淀粉酶的分子生物学研究 | 第21-22页 |
| ·耐热真细菌和放线菌的α-淀粉酶 | 第22-23页 |
| ·高嗜热古细菌P. furiosus的胞外α-淀粉酶 | 第23-25页 |
| ·立题背景及本文的研究任务 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-34页 |
| 第二章 Pyrococcus furiosus 胞外α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第34-44页 |
| ·材料和方法 | 第34-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·酶和试剂 | 第34-35页 |
| ·PCR 扩增 | 第35页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第36页 |
| ·DNA 重组与转化子的筛选 | 第36页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达及酶学性质 | 第36页 |
| ·酶活测定 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-41页 |
| ·P.furious 胞外α-淀粉酶基因的扩增与重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| ·培养液的淀粉酶活性分析 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第41页 |
| ·P. furiosus 胞外α-淀粉酶信号肽的作用 | 第41页 |
| ·影响高表达的因素分析 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 第三章 Pyrococcus furious胞外α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的分泌表达 | 第44-52页 |
| ·材料和方法 | 第44-45页 |
| ·菌株、质粒、引物和试剂 | 第44页 |
| ·DNA 重组、转化及阳性转化子筛选 | 第44-45页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达及酶学性质 | 第45页 |
| ·PFA 对宿主的毒性 | 第45页 |
| ·诱导温度对表达水平的影响 | 第45页 |
| ·低温破细胞方法 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·表达载体pEtac 的构建、P. furious 胞外α-淀粉酶基因的扩增及其与pEtac的重组 | 第45-47页 |
| ·培养液的淀粉酶活性分析 | 第47-48页 |
| ·重组酶酶活与热处理的关系 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·表达载体pEtac 的性质 | 第49-50页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第50页 |
| ·P. furiosus 胞外α-淀粉酶对宿主菌的毒性 | 第50页 |
| ·P. furiosus 胞外α-淀粉酶信号肽的作用 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌分泌型表达载体pUHxyls 的构建 | 第52-63页 |
| ·材料和方法 | 第52-53页 |
| ·载体和菌株 | 第52页 |
| ·引物及说明 | 第52-53页 |
| ·枯草杆菌染色体 DNA 的提取 | 第53页 |
| ·结果和讨论 | 第53-62页 |
| ·pETxyl 的构建 | 第55-57页 |
| ·pETxyl-amy 的构建 | 第57-59页 |
| ·pUHxyls 的构建 | 第59-62页 |
| ·本章小结 | 第62页 |
| 参考文献 | 第62-63页 |
| 第五章 Pyrococcus furiosus 胞外α-淀粉酶基因在枯草杆菌中的分泌表达 | 第63-73页 |
| ·材料和方法 | 第63-66页 |
| ·菌株和质粒 | 第63页 |
| ·引物与试剂 | 第63-64页 |
| ·质粒的大量提取 | 第64页 |
| ·枯草杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第64-65页 |
| ·枯草杆菌转化子质粒的提取和检测 | 第65-66页 |
| ·重组枯草杆菌的培养和诱导 | 第66页 |
| ·重组枯草杆菌质粒稳定性的检测 | 第66页 |
| ·重组枯草杆菌酶活的测定 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-71页 |
| ·重组质粒pUHxyls-PFA 的构建 | 第66-68页 |
| ·枯草杆菌WB700 的转化 | 第68页 |
| ·枯草杆菌转化子的酶活分析 | 第68-69页 |
| ·诱导条件对转化子产酶的影响 | 第69-71页 |
| ·木糖诱导对重组菌生长的影响 | 第69-70页 |
| ·诱导时间对产酶的影响 | 第70页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第70-71页 |
| ·重组酶的性质 | 第71页 |
| ·重组质粒的稳定性 | 第71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-73页 |
| 第六章 Pyrococcus furiosus 胞外α-淀粉酶基因在酿酒酵母和巴斯德毕赤氏酵母中的表达 | 第73-84页 |
| ·材料和方法 | 第73-77页 |
| ·菌株和质粒 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73-74页 |
| ·酶和试剂 | 第74-75页 |
| ·PCR 扩增 | 第75页 |
| ·DNA 重组、转化、阳性转化子筛选 | 第75页 |
| ·酵母电转化方法 | 第75页 |
| ·酿酒酵母中质粒的提取 | 第75-76页 |
| ·酵母的转化、重组酵母的鉴定 | 第76页 |
| ·重组毕赤氏酵母的诱导表达 | 第76页 |
| ·酶活测定 | 第76-77页 |
| ·结果 | 第77-81页 |
| ·P. furious 胞外α-淀粉酶基因的扩增与重组质粒pYX-PFA的构建 | 第77页 |
| ·重组酿酒酵母的构建与重组酶的表达 | 第77-78页 |
| ·重组质粒pPIC9K-PFA 的构建 | 第78-80页 |
| ·重组毕赤氏酵母的构建和重组酶的表达 | 第80-81页 |
| ·重组毕赤氏酵母发酵条件的初步分析 | 第81页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第81页 |
| ·讨论 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-84页 |
| 论文结论 | 第84-86页 |
| 论文创新点 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 博士研究期间在科学技术期刊上发表的论文 | 第88页 |
